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背景:肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在肿瘤-间质相互作用以及胃癌进展中发挥着不可忽视的功能,但肿瘤-间质相互作用及CAFs促进胃癌进展的机制仍不清楚。本课题的第一部分拟探索CAFs表达IL-33的调控机制以及IL-33促进胃癌进展的机制。转导素β样1X受体1(Transducin(β)-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1)是控制基因激活或沉默开关的重要调节子。TBL1XR1被发现在多种肿瘤中高表达,并且与肿瘤的发生发展密切相关。本课题的第二部分拟探索TBL1XR1介导胃癌发生发展的机制及其临床意义。方法:第一部分:通过免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)以及qRT-PCR检测134对胃癌组织及癌旁正常组织中IL-33及其受体ST2L的表达。采用组织块法,从胃癌组织中培养原代CAFs。通过qRT-PCR检测胃癌组织及细胞中TNF-?的表达。将CAFs与胃癌细胞(SGC7901和MKN45)共培养,并设置不同的实验组:CAFs,CAFs+TNF-?,CAFs+胃癌细胞,CAFs+胃癌细胞+TNF-?中和抗体,通过qRT-PCR和ELISA检测CAFs中IL-33的表达。通过qRT-PCR检测CAFs中TNFR2的表达。将TNF-?或NF-κB抑制剂(PDTC)刺激CAFs;将IRF-1真核表达质粒转染进CAFs中。通过双荧光素酶报告基因实验检测IRF-1与IL-33启动子的结合效应。将胃癌细胞与CAFs或CAF-siRNA/IL-33共培养,或用IL-33刺激胃癌细胞,或在共培养中加入IL-33或ST2L中和抗体或ERK抑制剂(U0126),通过Transwell小室检测胃癌细胞的迁移侵袭能力,通过qRT-PCR、WB检测胃癌细胞EMT的变化以及ERK信号通路的活化。将胃癌细胞与CAFs共培养,或单独加入IL-33刺激,或共培养中加入U0126;将SP1真核表达质粒转染进胃癌细胞中;通过qRT-PCR、WB检测胃癌细胞中SP1、pERK和ZEB2的表达。通过双荧光素酶报告基因实验检测SP1与ZEB2启动子区域的结合效应。第二部分:运用qRT-PCR、IHC和IF技术检测TBL1XR1在胃癌组织及细胞株中的表达。采用shRNA质粒敲低胃癌细胞NCI-N87和SGC7901中TBL1XR1的表达;采用TBL1XR1真核表达质粒上调胃癌细胞MKN45和BGC823中TBL1XR1的表达。通过CCK-8实验、流式细胞仪、划痕愈合实验、Transwell实验检测胃癌细胞的增殖能力、凋亡、迁移和侵袭能力。通过IHC、WB检测胃癌组织及细胞中pERK及EMT标志物的表达。采用U0126阻断ERK磷酸化后,检测NCI-N87、SGC7901增殖、迁移、侵袭能力变化以及EMT。采用U0126阻断过表达TBL1XR1的BGC823和MKN45中ERK磷酸化后,检测胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力变化以及EMT。将胃癌细胞NCI-N87/TBL1XR1-shRNA和BGC823/TBL1XR1注入裸鼠皮下或腹腔,观察TBL1XR1对胃癌细胞在裸鼠体内成瘤的影响。结果:第一部分:IL-33和ST2L在胃癌组织中高表达,而IL-33主要表达于CAFs中,ST2L主要表达于胃癌细胞中,两者均与患者临床病理特征如肿瘤局部浸润和TNM分期相关,并可作为判断预后的指标。与胃癌细胞共培养、或加入TNF-?刺激可明显促进CAFs表达IL-33,而在共培养体系中加入TNF-?中和抗体能够显著降低CAFs中IL-33的表达。TNF-?在胃癌组织及细胞中高表达,而TNFR2在CAFs中高表达,PDTC可抑制TNF-?所诱导的CAFs中IRF-1和IL-33的表达。上调IRF-1能促进CAFs表达IL-33。IRF-1可通过作用于IL-33基因的启动子区域,促进IL-33的表达。与CAFs共培养或加入外源L-33刺激后,胃癌细胞的迁移、侵袭及EMT能力明显增强。然而,在共培养体系里加入IL-33中和抗体或ST2L中和抗体或U0126或用siRNA将CAFs中IL-33敲低后,胃癌细胞的迁移、侵袭及EMT能力明显降低。此外,与CAFs共培养或受到外源性IL-33刺激后,胃癌细胞中SP1和ZEB2的表达明显升高,但在共培养体系里加入IL-33中和抗体或U0126能明显抑制胃癌细胞SP1和ZEB2的表达。上调胃癌细胞中SP1的表达能促进ZEB2的表达,但不能促进胃癌细胞ERK磷酸化,且SP1可通过作用于ZEB2基因启动子促进ZEB2的表达。第二部分:TBL1XR1在胃癌组织及细胞株中高表达,与患者临床病理特征如肿瘤局部浸润、TNM分期及较差的预后相关。敲低TBL1XR1的表达能明显抑制NCIN87和SGC7901细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT以及裸鼠体内成瘤能力。而上调TBL1XR1的表达能明显促进BGC823和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT以及裸鼠体内成瘤能力。敲低TBL1XR1能明显抑制胃癌细胞NCI-N87及SGC7901的ERK磷酸化,U0126能明显抑制胃癌细胞NCI-N87及SGC7901的增殖、迁移、侵袭及EMT,并能逆转TBL1XR1过表达所诱导的胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT等变化。结论:1.IL-33和ST2L在胃癌组织中高表达,且两者均与胃癌患者的临床病理特征及预后相关;胃癌细胞通过TNF-α/TNFR2/NF-κB/IRF-1信号通路促进CAFs表达IL-33,CAFs来源的IL-33通过ST2L/ERK/SP1/ZEB2信号通路促进胃癌细胞迁移侵袭和EMT。2.TBL1XR1在胃癌组织及细胞中高表达,其可通过激活ERK信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,是胃癌发生发展的重要介导者。