化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)是革兰氏阳性短棒状杆菌，是牛、羊和猪等重要经济动物的条件性致病菌，常寄生于上呼吸道和消化道的黏膜处，可引起多种器官和黏膜的化脓性感染，给养殖业造成较大的经济损失。Pyolysin(PLO)是化脓隐秘杆菌分泌的一种外毒素，是化脓隐秘杆菌的一种重要毒力因子，具有溶细胞等生物学活性。但是溶血素在化脓隐秘杆菌感染宿主的过程中的毒力机制，目前尚不十分清楚。本研究克隆了编码化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的plo基因，进行原核表达PLO，检测表达蛋白的溶血活性，发现表达的重组PLO蛋白具有明显的溶血活性，并利用重组蛋白制备了多克隆抗体，所制备的多抗能够有效的阻断溶血素的溶血活性。将重组PLO蛋白作用小鼠腹膜巨噬细胞RAW264.7，光学显微镜与电子显微镜观察表明重组PLO能够诱导RAW264.7细胞发生明显的细胞凋亡现象，如凋亡小体的出现、核固缩、染色质聚集等；DNALadder检测结果显示，染色体DNA在琼脂糖凝胶电泳后出现典型的“梯形”条带；Annexin V法检测细胞凋亡率，流式细胞仪分析结果显示：0.5μg/mL溶血素处理RAW264.7细胞48小时后细胞凋亡率达到50.1%；MTT法检测PLO对RAW264.7细胞的增殖抑制作用，结果显示：一定浓度下溶血素蛋白对小鼠RAW264.7有明显的增殖抑制作用，呈剂量和时间依赖性；试剂盒检测caspase3的活性，发现caspase3活性均比对照组升高；并检测重组PLO蛋白对RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子的影响，结果显示：RAW264.7细胞负载溶血素后TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10细胞因子分泌量有不同程度的提高。这表明溶血素蛋白能够诱导巨噬细胞发生凋亡，并产生一系列细胞因子。综上所述，本研究原核表达了化脓隐秘杆菌溶血素蛋白，鉴定其生物学功能并将其作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7，研究溶血素诱导小鼠巨噬细胞凋亡，为溶血素的毒力机制和化脓隐秘杆菌致病机制研究提供了基础与依据。