基于Sirt1-NF-κB途径研究解毒三根汤抑制结肠癌CT26细胞侵袭转移的研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bluebluewater
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目的 观察解毒三根汤(虎杖根、水杨梅根、藤梨根)和白藜芦醇对结肠癌CT-26细胞的侵袭能力的影响及对肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-asscciated fibroblast,CAF)中Sirt1-NF-κB相关影响的研究,探讨解毒三根汤在肿瘤微环境中的作用机制,为进一步的临床及科研实验提供理论依据。方法1)将SPF级的BALB/C小鼠随机分成正常生理盐水组、肿瘤模型组和解毒三根汤治疗组3组。造模成功7天后,正常生理盐水组和肿瘤模型组予生理盐水灌胃10天,解毒三根汤治疗组予三根汤灌胃10天,分组进行取血,并分离血清备用;2)CT-26细胞通过体外传代,收集其处于对数生长期的细胞,通过Transwell法观察不同血清组和白藜芦醇对CT-26细胞侵袭能力的影响;3)瘤相关成纤维细胞(CAFs)的建立:收集CT-26上清液,并以1:1比例与新鲜培养基配置条件培养基;收集对数生长期的L929细胞,用条件培养基体外培养72小时后,建立CAFs模型;4)经各组血清和白藜芦醇干预24小时后,Western Blot检测含药血清干预正常小鼠成纤维细胞后,NF-κB通路和Sirt1表达量;5)免疫荧光分析CAFs中NF-κB和通路和Sirt1表达量及作用位置。结果1)Transwell结果显示:解毒三根汤治疗组和白藜芦醇组透膜CT-26细胞数量与其他组相比明显减少,有显著统计学差异(P<0.01);2)Western Blot结果显示:24小时解毒三根汤组和白藜芦醇组干预的CAFs中Sirt1的表达量其他组明显上升,解毒三根汤组和白藜芦醇组较其他组磷酸化P65表达显著减少,磷酸化IKBα、磷酸化IKKαβ表达显著增加。有统计学意义(P<0.05);3)免疫荧光结果显示,解毒三根汤组和白藜芦醇组较其他组Sirt1荧光明显增强,并且与NF-κB共同作用于细胞核中。结论1)解毒三根汤和白藜芦醇能明显抑制小鼠结肠癌细胞CT-26的侵袭运动;2)解毒三根汤能增强CAFs中Sirt1的表达量,抑制CAFs中NF-κB通路的激活。
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