蛋白酶在细胞信号传导、细胞生长、形态维持和神经活动等生理过程中发挥着至关重要的作用。蛋白酶的过度表达或活性失调往往与疾病相关。对蛋白酶结构和功能的研究是生命科学研究中的热点。蛋白酶还被广泛应用于疾病的诊断和治疗、食品加工和皮革工业等领域。因此实现蛋白酶的灵敏检测具有很重要的实际意义。目前蛋白酶活性测定主要是采用福林比色法，但这种检测方法的重复性不够好且测定步骤很繁琐，不能满足快速测定大量实际样品的要求，所以急需开发简单、准确、灵敏的蛋白酶检测方法。荧光纳米材料，如金纳米簇、量子点等，由于具有荧光强度高、光稳定性强、斯托克斯位移较大和生物相容性好等优点，在生命科学领域具有很好的应用前景。基于此，本论文利用新型荧光纳米材料（金纳米簇、量子点）独特的光学性质，开发了两种无标记的蛋白酶检测方法和一种半胱氨酸检测方法，具体工作如下：（1）基于木瓜蛋白酶对牛血清白蛋白（BSA）包覆的金纳米簇（BSA-Au NCs）配体蛋白的降解提出了一种新的金纳米簇荧光淬灭机理，开发了一种无标记木瓜蛋白酶及其抑制剂胱抑素C的检测方法。木瓜蛋白酶对包覆在BSA-Au NCs表面的BSA的降解可引起BSA-Au NCs的聚集，进而使BSA-Au NCs的荧光发生淬灭。荧光强度的变化对木瓜蛋白酶的浓度有很好的响应。该方法对木瓜蛋白酶的检测有较低的检测限（0.07μg/mL）。在此基础上结合木瓜蛋白酶和其抑制剂胱抑素C的相互作用，实现对胱抑素C的检测。相较于其他胱抑素C的免疫检测方法，本方法是一种选择性高、稳定性好、成本低廉、操作简单且不需要合成昂贵的抗体和复杂的修饰过程的非免疫的检测方法，有着很低的检测限（4ng/mL）。此方法成功运用于实际尿样中胱抑素C的检测，且在添加回收实验中获得了令人满意的回收率（102.2%-114.9%）。本方法还可以拓展到其它蛋白酶及其抑制剂的检测。（2）木瓜蛋白酶的活性需要由半胱氨酸激活。基于前面开发的木瓜蛋白酶荧光传感器，通过半胱氨酸对木瓜蛋白酶活性的调节改变BSA-AuNCs的荧光，实现了对半胱氨酸的定量检测。该方法对半胱氨酸的检测获得了较低的检测限（15nM）和较宽的线性范围（0.02-10.0μM），并且具有选择性好、操作简单、费用低廉等特点。（3）基于无修饰量子点的聚集行为，构建了无标记的荧光分析方法来检测凝血酶的活性。带正电的底物多肽（GGLVPRGSCC）结合到带负电的CdTe量子点表面引起后者发生聚集，从而导致CdTe量子点的荧光淬灭。凝血酶的水解作用使得只有不带电的多肽片段（GSCC）结合在CdTe量子点表面，正电荷远离CdTe量子点表面，对CdTe量子点的影响减弱，CdTe量子点保持稳定、荧光信号保持。通过凝血酶加入前后荧光强度的变化实现对凝血酶活性的检测。此方法对凝血酶的检测有较低的检测限（1.5μU/mL），且在血清样品的添加回收实验中获得了较满意的回收率（94.3-104.7%）。与以往基于量子点的凝血酶活性检测方法相比，该方法不需要复杂的量子点修饰过程且响应速度快。利用酶标仪进行荧光检测为实现凝血酶类药物的高通量筛选提供了可能。