【摘 要】
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目的通过对人Cystatin M基因的克隆、表达，观察Cystatin M基因表达对乳腺癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗乳腺癌机制提供理论依据。方法巢式PCR方法扩
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目的通过对人Cystatin M基因的克隆、表达，观察Cystatin M基因表达对乳腺癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗乳腺癌机制提供理论依据。方法巢式PCR方法扩增Cystatin M目的片段，基因克隆技术构建pBudCE4.1-Cystatin M重组载体。采用氯化钙共沉淀法将重组子转化至大肠杆菌Top10中进行扩增，PCR、酶切、测序方法筛选阳性重组质粒。脂质体转染方法，将基因导入具有高侵袭性、高转移性的人乳腺癌细胞株ZR-75-30；Western-blot方法鉴定蛋白表达；噻唑兰比色(MTT)法检测Cystatin M表达对ZR-75-30细胞增殖能力及与基质胶(Matrigel)、人脐静脉内皮细胞(ECV304)粘附能力的影响；Transwell体外侵袭实验观察转染后肿瘤细胞侵袭和迁移能力的变化。结果1．在黏附实验、Transwell侵袭实验中，与空载体对照组ZR／pBudCE4.1和未转染组相比，实验组ZR／Cystatin M细胞与基质及内皮细胞的黏附能力、体外侵袭能力和运动能力均明显下降，差异具有统计学意义。2．在增殖实验中，实验组ZR／Cystatin M细胞的增殖能力(0.337±0.03)与空载体对照组(0.439±0.019)和未转染组(0.445±0.09)相比略有下降，但差异无显著性。结论Cystatin M表达可抑制乳腺癌细胞的黏附和侵袭能力，提示其可作为一个候选的乳腺癌转移抑制基因，并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。
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