论文部分内容阅读
【目的】Wnt信号参与胃癌发生的过程，其中β-catenin/Tcf4/Fzd5是经典Wnt信号传导通路中的关键蛋白,骨髓基质干细胞(Bone marrow stromalcells,BMSC)被认为参与胃癌的发生，但具体机制尚不清楚。本课题以Wnt信号传导通路为靶点，通过shRNA技术干扰小鼠骨髓基质干细胞β-catenin表达，探求BMSC在幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）慢性感染致胃癌发生过程中的可能机制。【方法】构建含有β-catenin-shRNA的特异性真核表达载体。BMSC用含10%FBS的DMEM培养液培养,按2×105/孔的浓度接种于Transwel上室,37℃、50mL/LCO2培养箱中培养24h,待细胞贴壁率达到60%后,用Lipo-fectamine2000进行转染。β-catenin-shRNA处理组为实验组,shRNA错义序列处理组为阴性对照组。测定转染率，转染48h后，采用WesternBlot方法检测BMSC中β-catenin的表达。然后按照BMSC、小鼠胃癌细胞（MFC）、Hp超声粉碎物(1:10:100)比例建立体外Transwell共培养体系，培养箱中共培养24h后，采用Real-timePCR方法和Western Blot方法检测MFC中β-catenin mRNA和总蛋白的变化。【结果】β-catenin-shRNA转染BMSC48h后，BMSC中β-catenin蛋白表达下降。BMSC、MFC、HP超声粉碎物共培养24h后，与阴性对照组相比，shRNA干扰MSC后，MFC中β-catenin总mRNA表达下降（0.488±0.120﹔1.026±0.057﹔P<0.05）,β-catenin蛋白表达亦下降（0.687±0.107﹔1.06±0.113﹔P<0.05）。【结论】BMSC参与调控Hp慢性感染致胃癌发生早期事件Wnt信号通路的过程。BMSC作为一种良好的基因工程细胞，可为今后胃癌的治疗提供新的思路和方法。