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目的通过构建2型糖尿病大鼠肝损伤模型,以不同剂量参芍口服液进行干预,观察血清生化指标、肝组织形态学以及肝组织TLR4、NF-κB、TGF-β1等炎症因子的表达水平的变化,探讨参芍口服液对糖尿病肝损害的干预作用及其可能机制。方法1分组:将50只170~200g的清洁级(Specific Pathogen Free,SPF)雄性Wistar大鼠随机分为:对照组(Control,C)、模型组(Model,M)、参芍口服液:低剂量治疗组(Treatment of low-dose,T-L)、中剂量治疗组(Treatment of medium-dose,T-M)、高剂量治疗组(Treatment of high-dose,T-H),每组10只。2制作2型糖尿病大鼠模型:适应性喂养1周后,对照组继续普通饲料喂养,实验组改用高脂饲料喂养,1个月后开始造模。M、T-L、T-M、T-H组按25mg/kg剂量腹腔内注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)(浓度1%,pH 4.5),C组腹腔内注射等体积柠檬酸钠缓冲液,连续2次空腹血糖≥16.7mmol/L,且有多饮、多尿、多食等出现,则可初步确认2型糖尿病模型成功。实验结束前再次测空腹血糖≥16.7mmol/L的为2型糖尿病模型成功,否则淘汰。3药物干预:造模成功后,分别给予T-L、T-M、T-H组125mg/Kg、250mg/Kg、500mg/Kg参芍口服液灌胃,C、M组给予等体积蒸馏水灌胃,所有组别均灌胃8周。4取材及处理:8周后,各组大鼠全部处死,取血及肝组织。采用全自动生化仪检测大鼠血糖(GLU)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)等指标,观察经参芍口服液干预后其变化情况;采用HE染色技术观察各组大鼠肝组织的形态学变化;采用Masson染色技术观察各组大鼠肝组织纤维表达情况;采用免疫组织化学染色技术观察各组大鼠肝组织TLR4、NF-κB、TGF-β1、IL-6、MMP-9的定位表达;采用Western blot技术对各组大鼠肝组织中TLR4、NF-κB、TGF-β1、IL-6、MMP-9的表达进行半定量检测。结果1模型组大鼠出现多饮、多食、多尿、精神不振、活动减少、毛色暗淡、体重减轻等现象,并经长时间观察及3次检测大鼠空腹血糖均明显升高且稳定,提示糖尿病大鼠模型成功;另外,模型组大鼠血清ALT、AST水平明显高于对照组,且HE显示肝细胞弥漫性肿胀,水样变性,窦间隙变窄,可见点状坏死,炎性细胞浸润,说明糖尿病大鼠出现了明显的肝损伤。2生化指标显示:与C组相比,M组大鼠体重、肝脏重量明显减低(P<0.05),而血糖、ALT、AST、TC、TG、LDL明显升高(P<0.05)。参芍口服液治疗各组,以上各项生化指标均有所改善,其中T-H组大鼠体重、肝脏重量显著增加,血糖、ALT、AST、TC、TG、LDL明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义。3 HE染色结果显示:与C组相比,M组肝细胞弥漫性肿胀,水样变性,伴有散在点状肝细胞坏死,肝窦狭窄甚至闭塞,核染色变浅或核消失,核被挤压到一侧,可见双核,汇管区周围可见纤维组织增生,炎性细胞浸润明显。经参芍口服液干预后,T-L组肝细胞水肿、水样变性,炎性细胞浸润有所好转,T-M组肝损伤进一步减轻,窦间隙增宽,T-H组未见肝细胞水肿,窦间隙正常,汇管区少量炎性细胞浸润。4 Masson染色结果显示:与C组相比M组大鼠肝组织中可见大量粗大的蓝色胶原纤维,沉积在血管、汇管区及狄氏间隙等处。参芍口服液干预组中:T-L组与M组相比变化程度不明显,仍可见较粗大的胶原纤维沉积,T-M组蓝色胶原纤维明显减少,胶原纤维变细,而T-H组仅见极少量蓝色胶原纤维,接近于正常对照组。5免疫组织化学染色结果显示:TLR-4蛋白主要表达于肝细胞膜,呈棕黄色颗粒沉着。与C组相比,M组黄色颗粒的沉积明显增多。T-L组黄色颗粒的沉积有所减少,但不明显,T-M组和T-H组黄色颗粒的沉积都有明显的减少,其中以T-H组效果最明显。同时,可以观察到NF-ΚB、TGF-β1、MMP-9、IL-6具有相似的表达情况:C组几乎无表达,M表达明显增多,T-L组表达有所减少,T-M组表达明显减少,T-H组仅有少量表达。6 Western blot结果显示:与C组相比,M组肝组织中TLR-4、NF-ΚB、TGF-β1、MMP-9、IL-6蛋白的表达明显升高(P<0.05)。参芍口服液治疗各组中,T-L组TLR-4、TGF-β1、IL-6蛋白的表达较模型组有所减少(P<0.05),而NF-ΚB、MMP-9虽也有下降趋势,但无显著意义;T-M组TLR-4、NF-ΚB、TGF-β1、IL-6蛋白的表达较模型组明显减少(P<0.05),但MMP-9的表达与模型组相比仍无显著差异;T-H组TLR-4、NF-ΚB、TGF-β1、MMP-9、IL-6蛋白的表达较模型组降低最显著(P<0.05)。结论1参芍口服液对糖尿病肝损害有保护作用,并在125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg范围内存在一定的剂量依赖关系;2参芍口服液对糖尿病肝损害的保护作用可能是通过调控TLR4、NF-κB介导的炎症损伤实现的。