论文部分内容阅读
复制机器（复制叉）与RNA聚合酶(RNAPs)在复制和转录过程中发生两种相撞（冲突），即头对头和追尾相撞。当转录的RNA聚合酶与复制机器相撞时形成障碍，导致复制滞留最终致DNA双链断裂。在复制机器和RNA聚合酶相撞时，DksA和Mfd蛋白在其他因子的帮助下从模板链上剥离RNA聚合酶，使滞留的复制再起始。那么复制是否影响转录呢？本文分别研究了质粒和染色体上复制和转录相撞对基因转录的影响。在ABTGcasa培养基中追尾相撞与头对头相撞比，提升基因转录但影响较小;而在LB培养基中尽管影响非常小但却降低基因转录。用HU抑制DNA复制后，发现引导链基因转录明显高于滞后链基因转录而且LB培养基中最高、ABTGcasa中其次、ABT中最低。这些结果说明引导链基因转录高于滞后链基因转录而且其依赖于营养条件。DksA蛋白是依赖于营养的转录因子。本文发现在LB培养基中，DksA的缺失导致质粒滞后链基因转录的明显提高但对染色体滞后链基因转录无明显影响，其原因尚不清楚;对引导链基因转录来说，DksA的缺失都提高了其转录。在ABTGcasa培养基中，DksA的缺失也提高了质粒滞后链基因转录，但对引导链基因转录无明显影响。同样检测发现Mfd蛋白的缺失在LB培养基中明显降低滞后链基因转录但对引导链基因转录无明显影响;而在ABTGcasa培养基中提高基因转录。结果说明当复制和转录相撞时Mfd影响基因转录，而且其作用依赖于营养。综上所述，DksA在复制和转录相撞时降低基因转录，Mfd也影响基因转录，而两者作用皆依赖于营养。 本文经过细胞周期参数的测定发现DksA蛋白影响染色体复制起始，而这种影响也依赖于营养条件。还发现△dksA突变细胞对紫外线(UV)和新型纳米药物N-卤胺和氧化锌敏感。进一步分析说明△dksA△recN双突变体细胞相对于△dksA和△recN单突变细胞，对UV更敏感而且DksA和RecN对DNA损伤修复不依赖于其他DNA修复途径。因此，本文认为DksA和RecN只修复由复制转录相撞导致的DNA损伤。