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猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2, SS2)是一种是在世界范围内引起猪多种形式感染的病原；也是一种人畜共患病病原,可引起人脑膜炎,严重危害着养猪业及相关从业人员的安全。目前虽然SS2感染后致病机理仍然没有完全明确,但认为细菌粘附作用及炎症反应在致病过程中起重要作用。细菌粘附并侵袭细胞在细菌定植黏膜屏障过程中不是必须的,但它们是细菌定植的重要一步。一旦细菌进入血液循环和/或达到深层组织,将会受到先天性免疫系统中吞噬细胞的作用；但SS能够抵御吞噬作用,并以高浓度细菌在血液中持续存在,结果引发炎症。但细菌粘附能力是否可以作为细菌致病力的标志,不同SS2菌株粘附能力的差异的分子机制仍未得到很好的阐明。研究单核细胞与细菌相互作用的过程中,单核细胞释放的炎性相关细胞因子,对阐明SS2介导和调节炎症反应中具有一定的意义。本研究选择不同来源的具有不同毒力因子的SS2菌株与PK-15、HEp-2及PIEC细胞共孵育3h后,观察SS2菌株粘附细胞的能力。并通过建立SS2粘附因子的荧光定量PCR检测方法,对粘附试验所用菌株的粘附因子mRNA转录水平进行检测,以确定粘附因子转录水平是否影响细菌粘附细胞的能力。同时通过建立猪细胞因子IL-1β、IL-18、IL-8、IL-12和IL-10的荧光定量PCR检测方法,检测部分菌株刺激3D4猪肺泡巨噬细胞后上述细胞因子mRNA转录水平的变化。1.SS2对PK-15、HEp-2和PIEC细胞的粘附作用用1.0×107CFU SS2菌株分别与PK-15、HEp-2和PIEC等3种细胞孵育3h后,平板计数。结果表明不同菌株对同一种细胞的粘附能力不同,同一株细菌对3种细胞的粘附能力也不同。相关蛋白酶处理后的细菌可以减弱这种粘附作用。表明SS2具有粘附相关上皮细胞和内皮细胞的能力,且这种粘附能力与菌株和细胞类型均有关联。而细菌粘附能力强弱与细菌毒力强弱之间没有必然的关系。2.猪链球菌2型粘附因子SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及体外mRNA转录水平的检测根据已经报导的SS2相关粘附因子及管家基因aroA,以GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR克隆和扩增了各粘附因子的核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立检测各粘附因子SYBR Green I荧光定量PCR方法。通过检测粘附试验中SS2各菌株粘附因子转录水平,初步阐明SS2粘附因子转录水平确实影响细菌粘附细胞的能力,为后续研究SS2粘附能力及致病机制提供研究平台。3.猪IL-1β、IL-18、 HL-8、IL-10、L-12及β-actin SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及SS2对3D4猪肺泡巨噬细胞炎症相关细胞因子的体外mRNA转录分析依据GenBank中登录的各猪细胞因子及管家基因β-actin的核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述三个因子的核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板(IL-8、IL-10及IL-12阳性质粒为本实验室构建保存),建立了检测各细胞因子及β-actin SYBR Green I荧光定量PCR方法。用建立的荧光定量PCR方法检测不同SS2菌株对3D4猪肺泡巨噬细胞系上述各细胞因子mRNA体外转录的影响。结果发现不同毒力、不同基因型的SS2菌株对细胞因子mRNA产生影响不同。