【摘 要】
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目的研究TLR4/MyD88的蛋白表达与AngⅡ诱导心肌肥厚的关系方法选取21只8-10周龄的C57BL/6雄性小鼠,随机分为三组:正常对照组(简称对照组),心肌肥厚组(简称肥厚组),心肌肥厚药
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目的研究TLR4/MyD88的蛋白表达与AngⅡ诱导心肌肥厚的关系方法选取21只8-10周龄的C57BL/6雄性小鼠,随机分为三组:正常对照组(简称对照组),心肌肥厚组(简称肥厚组),心肌肥厚药物干预组(简称肥厚干预组),每组7只。三组均皮下埋植微渗透泵,其中对照组以1.3mg/Kg/day的速度连续泵入生理盐水,肥厚组及肥厚干预组以1.3mg/Kg/day的速度连续泵入AngⅡ;期间对照组与肥厚组每周2次腹腔注射生理盐水,肥厚干预组每周2次腹腔注射TAK242。观察4周后处死小鼠,低温下快速取出心脏,置于提前预冷的生理盐水中,轻柔挤出心腔内的血液,反复2-3次后无菌纱布吸干心脏水分,以心脏最宽处及心尖部为切点,将心脏分成3部分,其中心室上段用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)经RNA提取,逆转录,cDNA扩增过程检测β肌球蛋白重链(beta—myosin heavy chain,β-MHC)mRNA表达;心室中段置于福尔马林中固定,经常规脱水,透明,包埋后石蜡切片用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察心肌细胞形态;心尖部用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)经蛋白质提取,电泳,转膜,封闭,一抗孵育,二抗孵育,化学发光,显影,定影过程检测TLR4和MyD88的蛋白表达水平。数据均采用SPSS20.0软件分析处理,P<0.05表明差异有统计学意义。结果1各组小鼠心肌细胞形态变化肥厚组心肌细胞横截面积明显大于对照组(3710.21±378.45vs1804.35±310.18,P<0.01),肥厚干预组小鼠心肌细胞横截面积明显小于肥厚组(3125.14±734.46 vs 3710.21±378.45,P<0.01)。2各组心肌细胞β-MHC mRNA表达变化肥厚组心肌细胞β-MHC mRNA表达水平高于对照组(P<0.05),予TAK242干预后肥厚鼠心肌细胞β-MHC mRNA表达受到抑制(P<0.05)。3各组心肌细胞TLR4、MyD88的表达变化肥厚组心肌细胞TLR4、MyD88的表达水平高于对照组(P<0.05),予TAK242干预后肥厚鼠心肌细胞TLR4、MyD88的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论1.在AngⅡ诱导的心肌肥厚中,TLR4和MyD88的蛋白表达水平增高。2.TAK242干预抑制TLR4和MyD88的蛋白表达后,心肌肥厚的程度得到改善,说明TLR4、MyD88参与心肌肥厚的发生发展过程。
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