机体的天然免疫和获得性免疫紧密联系，NK细胞与树突状细胞(DC)之间的对话(crosstalk)不仅影响天然免疫功能，对获得性免疫的形成、发展及结果有深远的影响。DC通过直接接触NK细胞及分泌细胞因子激活NK细胞，并通过上调NK细胞的活性而增强其抗肿瘤作用。同时活化的NK细胞可以激活DC，进一步影响T细胞的活化及是否向Th1方向发展，从而最终影响机体的免疫防御和免疫监视功能。　　 在DC与NK细胞之间的相互作用中，DC表面MICA分子(或其他NKG2D配体)与NK细胞表面NKG2D受体之间的相互作用，不仅直接介导两者之间的对话，并在MICA阳性肿瘤患者体内发挥着激活NK细胞，诱导DC吞噬凋亡肿瘤碎片并交叉递呈抗原、启动特异性免疫应答的作用。但若DC表面持续高表达NKG2D配体，对NK细胞具有怎样的影响，目前尚不清楚。　　 为此，我们制备了DC细胞持续表达MICA(小鼠为RAE-1ε)分子的pCD86-RAE-1ε转基因小鼠，并完成基因整合的初步筛选。本研究主要对转基因小鼠进行RAE-1ε蛋白表达和组织分布的鉴定，以及相关细胞免疫功能分析。研究内容主要分为以下两个部分：　　 第一部分：pCD86-RAE-1ε转基因小鼠的蛋白表达鉴定　　 目的：进一步明确10只PCR鉴定阳性小鼠体内RAE-1ε蛋白的表达情况。　　 方法：猝死小鼠，收取小鼠肺脏、肝脏、胸腺、肠等组织，通过Western Blot鉴定小鼠肝脏组织是否表达RAE-1ε，免疫组织化学技术检测各组织内RAE-1ε的表达情况，并利用流式细胞仪进一步鉴定脾脏单细胞悬液内DC、B细胞、巨噬细胞的表达情况。并在此基础上，对阳性转基因小鼠进行常规的交配传代及常规PCR鉴定。　　 结果：1)在10只F0代转基因小鼠中，得到抗原递呈细胞表面持续表达RAE-1ε蛋白的3只小鼠；2)3只阳性转基因小鼠传代到F4代，后代总的阳性率为51.69％以上，有望得到pCD86-RAE-1ε纯合子转基因小鼠。　　 结论：通过基因整合和蛋白表达水平的筛选，获得3只亲代小鼠，其交配的子代小鼠可于后续的相关研究。　　 第二部分：pCD86-RAE-1ε转基因小鼠的细胞免疫功能分析　　 目的：观察抗原递呈细胞持续表达RAE-1ε对相关细胞免疫功能的影响。　　 方法：首先观察阳性小鼠的生命体征，并取转基因小鼠脾脏、淋巴结制备成单细胞悬液，流式细胞术分别检测NK细胞和CTL细胞数目占总淋巴细胞的比例，表面受体NKG2D的表达，杀伤靶细胞活性，分泌IFN-γ的能力。同时检测CD4+T细胞的比例及表面NKG2D的表达情况。其次，取转基因小鼠脾脏来源的抗原递呈细胞(高表达RAE-1ε)，刺激野生型小鼠NK细胞和CTL细胞，流式细胞术检测细胞表面NKG2D受体表达、细胞毒活性及分泌IFN-γ的能力。最后，通过ELISA法比较转基因小鼠与野生型小鼠血清内sRAE-1ε和RAE-1ε抗体含量的差异。　　 结果：除部分阳性转基因小鼠出现脱毛症状外，未发现其他相关的异常生命体征。NK细胞和CTL细胞频率均未见明显变化，且其细胞表面NKG2D的表达明显上调，细胞的杀伤活性及分泌IFN-γ的能力均发生显著性升高；CD4+T细胞频率未发生改变，但表面NKG2D的表达明显上调。利用高表达RAE-1ε的抗原递呈细胞刺激野生型小鼠淋巴细胞，其CTL细胞表面NKG2D表达、细胞毒活性及分泌IFN-γ的能力均未发生明显改变；而NK细胞分泌IFN-γ的能力虽然未发生改变，但其NKG2D表达和细胞毒活性均明显上调。这提示高表达RAE-1ε的抗原递呈细胞短期刺激淋巴细胞后，可直接增强NK细胞的活性，但对CTL细胞影响不显著。最后，转基因小鼠与野生型小鼠血清内sRAE-1ε和RAE-1ε抗体含量均没有明显的差异。　　 结论：抗原递呈细胞持续高表达RAE-1ε可能导致小鼠自发性脱毛，并引起小鼠体内NK、CTL细胞免疫功能增强，但这两种现象是否有必然联系，期待深入研究。