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目的:基于NF-κB信号通路及细胞凋亡探讨心安颗粒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用及可能机制。方法:120只BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、心安颗粒低、中及高剂量组,每组20只。模型组及各给药组小鼠腹腔注射0.2ml含103TCID50柯萨奇病毒B3(CVB3)的病毒悬液建立VMC模型,正常组腹腔注射等体积不含CVB3的培养液。腹腔注射2小时后开始灌胃,利巴韦林组予利巴韦林片0.2mg/(g·d),心安颗粒低、中、高剂量组分别予心安颗粒10g、20g、40g(原药材)/(kg·d),模型组及正常组灌胃等体积生理盐水。每天灌胃1次,连续7天,实验期间每日观察并记录各组小鼠一般状态及死亡情况。第8天,称取各组小鼠体重(body mass,BM),摘眼球取血后以颈椎脱臼法处死小鼠。分离血清,ELISA检测血清肌钙蛋白I(c TnI)和一氧化氮(NO)浓度。迅速摘取心脏,电子分析天平称心脏质量(heart mass,HM),计算心脏指数(HM/BM);常规HE染色统计心肌病理积分;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测CVB3 mRNA表达;Western bolt法检测心肌NF-κB p65、P-IκBα及Caspase-3蛋白表达;免疫组化检测TNF-α、IL-6、IFN-γ及CD68巨噬细胞的表达。结果:1)小鼠死亡率:正常组无小鼠死亡。心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组小鼠死亡率较模型组均显著降低(P<0.01),低剂量组小鼠死亡率与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组小鼠死亡率均明显降低(P<0.01);与利巴韦林组比较,中、高剂量组小鼠死亡率变化均不明显,差异均无统计学意义(P>0.05)。2)心脏指数(HM/BM):与正常组比较,模型组及各药物组hm/bm均升高(p<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组hm/bm均明显降低(p<0.01),低剂量组hm/bm变化不明显(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组hm/bm均显著降低(p<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中剂量组变化不明显,高剂量组hm/bm有所降低,但差异均无统计学意义(p>0.05)。3)心肌病理积分:正常组小鼠心肌未见明显病理学变化。与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组小鼠心肌病理积分均显著降低(p<0.01),低剂量组小鼠心肌病理积分变化不明显(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组心肌病理积分明显降低(p<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中、高剂量组心肌病理积分略有升高,但差异均无统计学意义(p>0.05)。4)心肌cvb3mrna表达水平:正常组小鼠心肌未发现cvb3mrna表达。与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组cvb3mrna表达水平均显著降低(p<0.01),低剂量组cvb3mrna表达水平无明显变化(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组cvb3mrna表达水平均显著降低(p<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中、高剂量组cvb3mrna表达水平均降低,以高剂量组降低最明显(p<0.05)。5)血清ctni、no浓度检测:(1)与正常组比较,模型组及各药物组血清ctni浓度均升高(p<0.05);与模型组比较,各药物组血清ctni浓度均降低(p<0.05或p<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组血清ctni浓度均降低(p<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中、高剂量组ctni浓度有所升高,但差异无统计学意义(p>0.05)(2)与正常组比较,模型组及各药物组血清no浓度均升高(p<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组血清no浓度均明显降低(p<0.01),低剂量组血清no浓度无明显变化(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组血清no浓度均显著降低(p<0.01);与利巴韦林组比较,中、高剂量组no浓度有进一步降低趋势,但差异均无统计学意义(p>0.05)。6)tnf-α、il-6、ifn-γ蛋白及cd68巨噬细胞检测:(1)与正常组比较,模型组及各药物组tnf-α蛋白mod值均升高(p<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组tnf-α蛋白mod值均降低(p<0.05),低剂量组tnf-α蛋白mod值与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组tnf-α蛋白mod值均降低(p<0.05);与利巴韦林组比较,高剂量组tnf-α蛋白mod值轻度升高,差异无统计学意义(p>0.05)。(2)与正常组比较,模型组及各药物组il-6蛋白mod值均升高(p<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组il-6蛋白mod值均降低(p<0.05),低剂量组il-6蛋白mod值与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组il-6蛋白mod值均降低(p<0.05);与利巴韦林组比较,高剂量组il-6蛋白mod值有进一步降低趋势,但差异无统计学意义(p>0.05)。(3)与正常组比较,模型组及各药物组ifn-γ蛋白mod值均升高(p<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组ifn-γ蛋白mod值均降低(p<0.05),低剂量组ifn-γ蛋白mod值与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组ifn-γ蛋白mod值均降低(p<0.05);与利巴韦林组比较,心安颗粒中、高剂量组ifn-γ蛋白mod值有进一步降低趋势,但差异均无统计学意义(p>0.05)。(4)在正常组小鼠心肌中未见cd68阳性巨噬细胞浸润。与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组cd68巨噬细胞数目明显减少(p<0.01),低剂量组cd68巨噬细胞数目与模型组比较差异无统计学意义(p>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组cd68巨噬细胞数目显著减少(p<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中剂量组cd68巨噬细胞数目增加(p<0.05),高剂量组与利巴韦林组比较差异无统计学意义(p>0.05)。7)nf-κbp65、p-iκbα及caspase-3蛋白检测:(1)与正常组比较,模型组及各药物组NF-κB p65蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.01),低剂量组NF-κB p65蛋白表达与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒中、高剂量组NF-κB p65表达均增加(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组、利巴韦林组、心安颗粒低、中剂量组心肌P-IκBα蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,心安颗粒中、高剂量组及利巴韦林组P-IκBα蛋白表达均降低(P<0.01),低剂量组P-IκBα蛋白表达与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组及利巴韦林组P-IκBα蛋白表达降低(P<0.01);与利巴韦林组比较,心安颗粒高剂量组P-IκBα表达降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与正常组比较,模型组、利巴韦林组、心安颗粒低、中剂量组Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,心安颗粒各剂量组Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.01);与低剂量组比较,高剂量组Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),中剂量组变化不明显(P>0.05);与利巴韦林组比较,心安颗粒各剂量组Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.01)。结论:1)VMC发病过程中存在着NF-κB信号通路的激活及细胞凋亡的发生。2)心安颗粒可明显缓解VMC小鼠心肌炎症反应和心肌损害,对心肌具有保护作用。3)心安颗粒的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活及病毒复制;调节Caspase-3蛋白表达水平,减弱凋亡信号传导,抑制心肌细胞凋亡等有关。4)心安颗粒对VMC小鼠的保护作用存在一定量效关系。在抑制VMC小鼠心肌中病毒复制,降低血清NO浓度、心肌中IFN-γ及Caspase-3蛋白表达水平方面,显示出优于利巴韦林的趋势。