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目的:通过细胞学实验,探究晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)对人关节软骨细胞中IL-1β和TNF-α的影响,观察AMPK/SIRT-1在此过程中的作用及其与PPARγ的关系。方法:(1)不同浓度的AGEs(25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml)分别处理人关节软骨细胞24h后用Western Blot方法检测细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白表达水平,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。(2)AGEs(100μg/ml)处理人关节软骨细胞6h,12h,18h,24h后,用Western Blot测定炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白浓度,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。(3)不同浓度的AGEs(25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml)处理人关节软骨细胞24h后,Western Blot方法检测细胞p-AMPK、AMPK、SIRT-1的蛋白表达。(4)AGEs(100μg/ml)处理人关节软骨细胞6h,12h,18h,24h后,用Western Blot方法检测细胞内p-AMPK、AMPK、SIRT-1的蛋白表达水平。(5)使用选择性AMPK激动剂A-769662和选择性AMPK抑制剂Dorsomorphin 2HCl对人关节软骨细胞进行预处理,1h后用AGEs(100μg/ml)处理24h后,Western Blot检测细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白表达水平,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。(6)使用选择性SIRT-1激动剂SRT1720和选择性SIRT-1抑制剂EX 527对人关节软骨细胞进行预处理,1h后用AGEs(100μg/ml)处理24h后,Western Blot检测细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白表达水平,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。(7)用选择性PPARγ激动剂吡格列酮(10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L)预处理1h后,使用AGEs(100μg/ml)处理人关节软骨细胞24h,采用Western Blot方法检测细胞p-AMPK、AMPK、SIRT-1的蛋白表达。结果:(1)不同浓度的AGEs处理人关节软骨细胞24h后,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达较对照组(0μg/ml)明显升高(P<0.05),且随AGEs浓度的升高而增加。(2)100μg/ml AGEs处理人关节软骨细胞6h,12h,18h,24h后,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达胶对照组(0h)明显升高(P<0.05),且随AGEs处理时间的延长而增加。(3)不同浓度的AGEs处理人关节软骨细胞24h后,AMPK磷酸化程度和SIRT-1蛋白浓度较对照组(0μg/ml)明显降低(P<0.05),且随AGEs浓度的升高而降低。(4)100μg/ml AGEs处理人关节软骨细胞6h,12h,18h,24h后,AMPK磷酸化程度和SIRT-1蛋白浓度较对照组(0h)明显降低(P<0.05),且随AGEs作用时间的延长而降低。(5)A-769662预处理人关节软骨细胞1h后,再使用100μg/ml AGEs处理人关节软骨细胞24h,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达较阳性对照组(100μg/ml AGEs)明显降低(P<0.05);而Dorsomorphin 2HCl预处理人关节软骨细胞1h,再使用100μg/ml AGEs处理24h,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达较阳性对照组(100μg/ml AGEs)明显升高(P<0.05)。(6)SRT1720预处理人关节软骨细胞1h后,再使用100μg/ml AGEs处理人关节软骨细胞24h,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达较阳性对照组(100μg/ml AGEs)明显降低(P<0.05);而EX 527预处理人关节软骨细胞1h,再使用100μg/ml AGEs处理24h,IL-1β和TNF-α的蛋白浓度和m RNA的表达较阳性对照组(100μg/ml AGEs)明显升高(P<0.05)。(7)不同浓度的吡格列酮(10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L)预处理人关节软骨细胞1h后,用100μg/ml AGEs处理24h,AMPK磷酸化程度和SIRT-1蛋白浓度较阳性对照组(100μg/ml AGEs)明显升高(P<0.05)。结论:AGEs可通过抑制AMPK磷酸化和SIRT-1的表达,诱导人关节软骨细胞IL-1β和TNF-α的升高;PPARγ激动剂吡格列酮可以抑制AGEs对软骨细胞的促炎作用,拮抗AGEs对AMPK磷酸化和SIRT-1表达的抑制作用。