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第一部分芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响目的:研究芹菜素对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖抑制情况;光镜及电镜进行形态学观察;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布的改变;免疫组化检测cyclin B1蛋白表达差异;Western blot技术检测caspase-3蛋白表达变化。结果:(1)芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖有明显抑制作用,芹菜素与细胞抑制作用之间具有时间-剂量依赖性。(2)TEM观察发现,经38.1μmol/L芹菜素处理48h的细胞出现了胞膜上微绒毛消失、染色质边集、核浓缩、核碎裂,见凋亡小体形成。(3)FMC结果表明,经40、80μmol/L芹菜素作用48h后,细胞特异性停滞于G2/M期,细胞发生凋亡,DNA组方图出现典型的凋亡峰,且随着浓度增加,凋亡百分率逐渐增高。(4)免疫组化结果显示芹菜素可使人乳腺癌细胞的cyclin B1蛋白表达降低。(5)Western blot结果显示芹菜素上调细胞的caspase-3蛋白表达。结论:芹菜素有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,特异性阻滞细胞于G2/M期;上调caspase-3蛋白表达从而诱导MDA-MB-231细胞凋亡。第二部分芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响目的:研究芹菜素对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响,探讨相关的作用机制。方法:运用MTT法检测芹菜素对MDA-MB-231细胞粘附能力抑制情况;Millicell小室检测MDA-MB-231细胞的体外侵袭及转移能力的改变;免疫组化检测uPA、MMP-9蛋白表达差异;Western blot技术检测p38MAPK蛋白表达变化。结果:(1)芹菜素能明显抑制MDA-MB-231细胞粘附、侵袭及转移能力,且随浓度增加,抑制作用增大。(2)免疫组化结果显示随芹菜素浓度增加,MDA-MB-231细胞的uPA和MMP-9蛋白表达均逐渐降低。(3)Western blot结果显示芹菜素下调p38MAPK蛋白表达。结论:芹菜素可能通过阻断p38MAPK信号通路减少uPA蛋白表达从而促使MMP-9蛋白表达下调,从而抑制MDA-MB-231细胞的侵袭及转移能力。