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乳酸菌胞外多糖(Lactic acid bacteria exopolysaccharide,LAB EPS)具有多种生物活性,对其研究与开发具有重要的实际意义与良好的应用前景。本研究以实验室保存鉴定的乳酸菌为出发菌株,筛选能够增强细胞免疫活性的乳酸菌EPS,随后将其进行分离纯化及结构初步鉴定,在此基础上探讨其对免疫细胞活性及机体特异性免疫应答的影响。结果如下:1.对实验室保存鉴定的110株乳酸杆菌所产EPS进行测定,筛选10株高产EPS 乳酸杆菌,其中Lactobacillus harbinensis TCP086、Lactobaillus kefiri SXJ29和Lactobacillus casei SXJ30所产EPS可以增强巨噬细胞增殖、吞噬以及NO释放能力。2.将上述 Lactobacillus harbinensis TCP086、Lactobacillus kefiri SXJ29 和Lactobacillus casei SXJ30 所产 EPS 经过 DEAE-Sepharose Fast Flow 和 Sepharose CL-6B色谱柱进行分离纯化后获得主要均一组分:TCP086 EPS、SXJ29 EPS和SXJ30 EPS。紫外光谱和红外光谱扫描发现三种EPS均不含核酸和蛋白质,且均具有多糖的特征吸收峰,存在αα型吡喃糖环构型;多角度激光光散射仪检测其分子量分别为4.908 × 104 Da、3.423 × 104 Da和3.737 × 104 Da;离子色谱检测单糖组成发现,三种EPS均由氨基葡萄糖、阿拉伯糖、氨基半乳糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖以及葡萄糖醛酸等7种单糖组成,其中TCP086 EPS各主要组分摩尔比氨基葡萄糖:氨基半乳糖:甘露糖:葡萄糖醛酸约为2.6:1.6:1.2:1;SXJ29EPS各主要组分摩尔比葡萄糖:氨基半乳糖:氨基葡萄糖约为3.1:1:1;SXJ30 EPS各主要组分摩尔比葡萄糖:氨基葡萄糖:甘露糖约为1.4:1.1:1。3.进一步以纯化的TCP086 EPS、SXJ29 EPS和SXJ30 EPS刺激巨噬细胞,对其增殖能力、吞噬中性红能力、NO释放能力、细胞因子分泌以及表面分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达进行检测后发现,巨噬细胞的免疫增强活性与EPS的浓度呈正相关,且SXJ30 EPS对巨噬细胞的免疫增强活性最强。4.在体外成功利用IL-4和GM-CSF诱导获得小鼠骨髓来源树突状细胞,显微镜下观察SXJ30EPS刺激小鼠BMDCs后,细胞突起增多,体积增大;流式细胞术和ELISA法检测后发现,SXJ30 EPS能显著增强小鼠BMDCs表面CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达以及细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-10和IL-12)的分泌。5.将SXJ30 EPS与OVA抗原免疫小鼠,发现SXJ30 EPS可以显著提高小鼠脾脏DCs表面CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达量;与铝盐(Alum)佐剂相比,SXJ30 EPS可以显著提高小鼠血清中OVA特异性IgG抗体以及IgG抗体亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的滴度;此外,SXJ30EPS还能显著促进脾脏T淋巴细胞增殖以及INF-γ和IL-4的分泌;显著提高脾脏IL-4+ CD4+ T细胞、IFN-γ+CD4+ T细胞以及IFN-γ+ CD8+ T细胞的比例,与Alum佐剂相比差异显著。上述结果提示:SXJ30 EPS在体外不仅可以增强巨噬细胞免疫活性,还能促进树突状细胞成熟和前炎性因子分泌。SXJ30 EPS可以显著提高小鼠对OVA抗原Th1型和Th2型免疫应答,其中主要以Th2型免疫应答为主。该研究为免疫增强剂的筛选和应用提供了可靠的理论指导和实验资料。