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结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是结核病的主要致病菌。找到结核分支杆菌的特异性抗原对于发展准确有效的诊断方法具有重要作用。结核分支杆菌TB4抗原是特指分子量集中于32KD~40KD、及28KD、23KD~25KD的多肽抗原组。它是与结核病特异性诊断相关的成份，对结核病诊断的敏感性为0.9012，特异性为0.9639。可见，这一成份在结核病诊断中具有一定的应用价值。按照传统的方法，TB4抗原的制备，要从结核分支杆菌H37Rv菌株中提取，既费时又费事，对人体造成致病威胁。而采用基因工程技术制备TB4抗原则克服了上述困难。本研究从灭活的人型结核分支杆菌H37Rv菌株中提取细菌总DNA，根据TB4两种抗原成份：TB32Ag和MPT64Ag的基因合成引物（P1，P2），以总DNA为模板，用特异性引物（P1，P2）进行聚合酶链式反应（PCR），扩增出TB32Ag，MPT64Ag基因， 并进行核苷酸序列分析。结果表明：所克隆的TB32Ag由568 bp组成，编码189个氨基酸； MPT64Ag由644 bp组成，编码214个氨基酸。为了在原核细胞中表达抗原蛋白，将PCR扩增所得的TB32Ag、MPT64Ag基因与原核表达载体pPROEX HTa质粒进行连接。然后将之转化到大肠杆菌DH5a菌中, 任意挑选阳性克隆用IPTG诱导表达。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达蛋白：含TB32Ag基因的重组菌表达4种融合蛋白，分子量分别约为：28KD、24KD、19KD、16KD；而含MPT64Ag基因的重组菌表达一种分子量为33KD的融合蛋白。为了检测表达蛋白的免疫学性质，通过免疫印迹将表达蛋白转印至<WP=7>PVDF膜上，用抗结核分支杆菌多克隆抗体与之反应，加底物显色后，分别显示相应条带，这说明表达产物具有一定的免疫学活性。 上述工作为进一步研究TB4抗原在结核病诊断中的作用奠定了一定的基础。