‘伦晚’脐橙果实发育期糖酸动态变化及代谢相关基因表达分析

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‘伦晚’脐橙(Citrus sinensis(L.)Osb.)是华盛顿脐橙的芽变品种,属晚熟品种。但由于在我国栽培时间较短,‘伦晚’脐橙果实品质研究,尤其是对有机酸代谢的相关研究较少。本研究以‘伦晚’脐橙与‘纽荷尔’脐橙为主要材料,分析果实发育期间糖、酸变化情况,并对果实有机酸积累相关基因进行挖掘与表达分析;同时研究低温对果实有机酸积累的影响。具体研究结果如下:1.果实发育期间可溶性糖与有机酸变化情况对果实发育期间可溶性糖含量与有机酸含量进行测定,发现‘伦晚’脐橙果实自花后172天起,可溶性糖含量随果实发育不断增加至11.3%后趋于稳定,与‘纽荷尔’脐橙接近;有机酸含量随果实发育不断降低至0.85%后稳定(花后264天),但在‘纽荷尔’脐橙采收前,‘伦晚’脐橙有机酸含量显著高于‘纽荷尔’脐橙。柠檬酸是‘伦晚’脐橙在果实发育期间所积累的主要有机酸,且‘伦晚’脐橙与‘纽荷尔’脐橙果实发育期有机酸含量的差异主要由柠檬酸含量的差异造成。2.‘伦晚’脐橙柠檬酸代谢相关基因表达分析通过同源序列比对结合基因注释筛选的方法,共挖掘到15个编码柠檬酸代谢相关酶的基因(CsACO1,CsACO2,CsACO3,CsPEPC1,CsPEPC2,CsCS1,CsCS2,CsNADP-IDH1,CsNADP-IDH2,CsNADP-IDH3,CsGAD1,CsGAD2,CsGAD3,CsGS1,CsGS2)。对挖掘到的基因与前人报导过的部分基因(CsPH8,CsCIT1)进行q RT-PCR分析,发现CsNADP-IDH2与CsGS1在‘伦晚’脐橙中的表达量要显著低于‘纽荷尔’脐橙,而在果实发育过程中的多数时期‘伦晚’脐橙中CsPH8的表达量要高于‘纽荷尔’脐橙中的表达量。综上,CsNADP-IDH2、CsGS1、CsPH8的共同作用可能是导致‘伦晚’脐橙在果实发育期间表现出高有机酸积累现象的主要原因。3.低温对‘伦晚’脐橙柠檬酸积累的影响及作用机制解析对‘伦晚’果实进行低温处理,同时以室温作为对照。结果表明,低温处理15天后,‘伦晚’脐橙柠檬酸含量显著低于常温处理15天后的‘伦晚’脐橙,表明低温下‘伦晚’脐橙的柠檬酸降解速度加快;且低温处理后CsNADP-IDH1、CsGAD2的表达量显著上调,表明这两个基因可能参与低温下柠檬酸降解加速过程。对‘伦晚’脐橙中CsNADP-IDH1与CsGAD2启动子进行克隆并分析,发现CsNADP-IDH1与CsGAD2的启动子序列与甜橙基因组中序列一致,且含有与低温响应有关的LTR、MYB、MYC等元件,可能通过相应转录因子的调控从而响应低温。克隆‘伦晚’脐橙中CsNADP-IDH1、CsGAD2的CDS序列,分析发现CsNADP-IDH1具有Ic D结构域,是典型的异柠檬酸脱氢酶,而CsGAD2具有Gad结构域,为谷氨酸脱羧酶;且家族分析表明CsNADP-IDH1与拟南芥中At NADPIDH1亲缘关系最近,CsGAD2与At GAD1亲缘关系最近。甜橙愈伤组织瞬时转化实验中,超表达CsNADP-IDH1与CsGAD2的甜橙愈伤组织中柠檬酸含量显著下降;此外,在‘伦晚’脐橙与‘纽荷尔’脐橙果实柠檬酸含量快速下降的时期中,CsNADP-IDH1与CsGAD2的表达量与柠檬酸含量显著负相关。综上所述,低温下‘伦晚’脐橙通过上调CsNADP-IDH1与CsGAD2的表达从而加速果实柠檬酸的降解。
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