论文部分内容阅读
目的探讨在基因水平上不同聚集状态的Aβ1-42对小胶质细胞炎性反应的激活及其海风藤提取物对激活的小胶质细胞表达炎性因子白细胞介素1β(IL-1p)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制作用;研究制备寡聚体p淀粉样蛋白(Aβ)1-42的方法。方法1.体外培养小鼠小胶质细胞株BV2;2.制备寡聚体和纤丝状Aβ1-42并分别使用透射电镜鉴定。3.将细胞随机分为4组:空白对照组、无Aβ1-42干预组、寡聚体Aβ1-42组和纤丝状Aβ1-42组,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的海风藤提取物对BV2细胞活力的影响;4.分别采用寡聚体Ap1--42、寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物、纤丝状Aβ1-42、纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物,干预小胶质细胞48h,并设空白对照组,应用实时荧光定量PCR测定各组IL-1β和TNF-α的表达水平结果1.寡聚体Aβ1-424℃孵育2周后,在电镜下观察以单体存在,呈球形或颗粒形,直径在15-30nm之间,大小较均一,未发现纤丝状物质形成;纤丝状Aβ1-4237℃孵育1周后,电镜下观察到大部分Aβ1-42呈纤丝状交聚,少量呈单体存在。2.MTT结果显示,海风藤提取物在10-80g/L范围内对细胞活性无影响。3.实时荧光定量结果显示,4个实验组的小胶质细胞表达IL-1β和TNF-α的水平均高于空白对照组,而寡聚体Ap1-42组表达IL-1β和TNF-α的水平高于纤丝状Aβ1-42组;寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于寡聚体Ap1-42组,纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于纤丝状Aβ1-42组。结论1.不同聚集状态的Aβ1-42均能在基因水平上激活小胶质细胞,而寡聚体状态的Aβ1-42诱导小胶质细胞产生的炎性反应更为活跃。2.海风藤提取物对寡聚体和纤丝状Aβ1-42激活的小胶质细胞在基因水平上释放炎性因子都有较明显的抑制作用。3.成功制备稳定存在的寡聚体Aβ1-42