崇明水仙种质资源细胞学分析及ISSR分子鉴定

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崇明水仙,属石蒜科(Amaryllidaceae)、水仙属(Narcissus Linn.)多年生草本植物,与福建漳州水仙、普陀水仙、平潭水仙以及浙江舟山水仙等统称为中国水仙(Narcissus lazella Linn. var. chinensis Roem)的一种栽培类型,在崇明县已有400多年的栽培史。崇明水仙具有花香幽雅、水养期、花期长等特点,尤其是崇明重瓣水仙以其浓郁芳香著称于国内外花卉市场,可与英国玫瑰齐名。但目前栽培品种很少,且品种混杂,由于品种资质的退化、品质下降及病毒病的发生等因素的影响,崇明水仙几乎到了灭绝的边缘。2007年,上海市已将崇明水仙列入专项拯救计划中。本文对崇明水仙种质资源的细胞学背景、ISSR-PCR反应体系及分子鉴定进行了研究,以期为确定崇明水仙优质种源,为改良球茎和花型、调控花期、制定切实可行的栽培保种措施,为崇明水仙的推广和应用奠定基础。研究结果如下:1.利用染色体核型分析方法研究崇明水仙的细胞学背景。研究发现:在崇明水仙染色体压片制片过程中,利用对二氯苯饱和溶液预处理立体根尖能够获得较多的中期分裂细胞,适宜的预处理时间为12h;崇明水仙、漳州水仙以及漳州水仙变异品种状元水仙均为三倍体,体细胞染色体数目为30(2n=3x=30),都具有1对随体染色体,随体在第7组染色体上;重瓣花崇明水仙的核型公式为2n=3x=30=15st+15sm(3SAT),单瓣花崇明水仙的核型公式为2n=3x=30=15st (3SAT)+15sm,重瓣花漳州水仙核型公式是2n=3x=30=15st+15sm(3SAT),单瓣花漳州水仙核型公式是2n=3x=30=15st(3SAT)+15sm,状元水仙核型公式是2n=3x=30=3m+12st+15sm(3SAT),其核型类型均为3B型。将崇明水仙核型与漳州水仙核型比较,结果显示崇明水仙和漳州水仙都是节段异源三倍体。2.通过崇明水仙ISSR分子标记分析,显示崇明水仙基因组中存在非常丰富的(CT)微卫星,为今后崇明水仙的分子水平研究的引物的设计和合成提供参考依据;正交设计优化的ISSR-PCR反应体系比采用单因素优化的反应体系更稳定,根据正交设计优化得到崇明水仙ISSR-PCR反应体系为:20μl反应体系中各参数的含量为50 ng模板DNA, 1U Tag DNA聚合酶,0.5μM引物,0.3mMdNTPs,2.5μ110×PCR buffer,最佳退火温度为56.8℃;PCR扩增产物图谱显示,扩增得到115个ISSR标记位点,其中多态性位点36个,占总数的31.3%,崇明水仙和漳州水仙平均Nei’s相似性系数为0.965,表明它们之间的的亲缘关系较近。基于研究结果,建议可以考虑采用秋水仙素的染色体加倍技术对崇明水仙组织和器官进行诱导,诱发产生突变;采用转基因手段,将其他花色基因转入崇明水仙中,从而获得鳞茎增大、侧脚和花枝增多、花器官增大、花色丰富的崇明水仙新品种。
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