防御素是生物界广泛存在的一类具有微生物抗性的低分子肽，其中哺乳动物防御素的抗菌谱最广，具有很高的应用潜力。猪β防御素-2以其广谱高效的杀菌活性、不易使微生物对其产生耐药性及细胞毒性小等特点倍受人们的关注。本研究以猪β防御素-2氨基酸序列为基础，设计定点突变，并对其定点突变基因进行克隆表达及蛋白活性分析。具体的研究内容如下：　　 1.利用生物信息学手段，预测分析含有不同突变位点的PBD2理化性质，从中选择了二级结构不变，净电荷含量增加、两亲性强、比较稳定的突变点。　　 2.以实验室已经得到的猪β防御素-2基因为模板，设计合成含突变碱基的引物，通过PCR扩增出8个定点突变基因序列(即mpBD2-1～8)，连接pMD19-T克隆载体，经限制性内切酶NcoⅠ和HindⅢ双酶切之后连接到pET30a质粒上后转进表达菌株BL21(DE3)PlysS中，成功构建了不同突变点的工程菌株。　　 3.对工程菌株BL21-pET30a-mpBD2-1～8进行诱导表达，SDS-PAGE分析表明目的蛋白的分子量与预期的基本相符，并且目的蛋白的含量约占总蛋白含量的12.8％。经超声波破碎，镍离子柱亲和层析纯化得到融合蛋白，纯度可以达到90％以上。对其进行抑菌活性和溶血活性分析。结果显示，所有突变的防御素均对大肠杆菌利金黄色葡萄球菌有抑制作刚，且对金黄色葡萄球菌的抑制作用更强一些。溶血试验发现，这些防御素的溶血率均低于5％，其细胞毒性很小。综合分析筛选出了mPBD2-1、mPBD2-2、mPBD2-3三种相对未突变的PBD2抗菌活性较高的新型防御素，为进一步的多点突变和结构功能关系的研究打下基础。