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目的高通量筛选胃癌组织中异常表达的mi RNAs,选择在胃癌组织中高表达的mi RNA-520d-5p,并探讨其对人胃癌细胞增殖、迁移和侵袭方面的作用。方法从3对手术切除的胃癌组织和配对的癌旁正常胃组织中提取总RNA,mi RNA芯片分析法检测mi RNA表达水平,然后在47例相互配对的胃癌和癌旁正常胃组织标本中,用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR,Taqman法)对部分差异表达的mi RNA进行验证。利用脂质体在胃癌细胞系AGS和HGC-27中瞬时转染mi R-520d-5p inhibitor(mi R-520d-5p抑制剂)以降低mi R-520d-5p的表达水平,mi R-520d-5p inhibitor negative control(mi R-520d-5p抑制剂阴性对照)组做阴性对照组(简称NC组)。转染48h后,Real-time RT-PCR检测转染后各组细胞系中mi R-520d-5p的表达水平。WST-1实验和细胞克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,细胞划痕实验和transwell迁移实验检测细胞的迁移能力,transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果1.mi RNA芯片分析结果显示:与配对的正常胃组织相比,有62个mi RNAs在胃癌组织中异常表达,其中42个mi RNA高表达,20个mi RNA低表达。2.Real-time RT-PCR结果显示:mi R-520d-5p在胃癌组织中表达显著提高(P=0.032)。3.转染mi R-520d-5p inhibitor后,Real-time RT-PCR检测AGS和HGC-27中mi R-520d-5p表达水平,结果显示:与阴性对照组比较,mi R-520d-5p的表达分别降低了62倍(P<0.001)和88倍(P<0.001)。以上结果表明:通过瞬时转染mi R-520d-5p inhibitor可有效下调mi R-520d-5p在胃癌细胞系中的表达水平。4.WST-1实验显示在AGS和HGC-27细胞中降低mi R-520d-5p的表达96h后,与对照相比细胞生长速度均明显减慢,分别降低35.08%(F=51.496,P<0.001;和21.03%F=56.689,P<0.001)。细胞克隆形成实验结果显示AGS/NC组克隆形成数为137.7+13.1个,实验组AGS/mi R-520d-5p inhibitor克隆形成数为56.7+8.5个,差异有统计学意义(t=9.006,P=0.001);HGC-27NC组克隆形成数为111.7+10.0个,实验组HGC-27/mi R-520d-5p inhibitor克隆形成数为58.3+5.5个,差异有统计学意义(t=8.081,P=0.001)。以上结果表明:降低mi R-520d-5p的表达水平能抑制胃癌细胞的增殖和克隆形成能力。5.流式细胞仪分析细胞周期分布结果显示,与NC组相比,降低mi R-520d-5p表达后,AGS和HGC-27细胞S期细胞数分别增加11.88%(T=-20.193,P<0.001)和13.94%(T=-6.578,P=0.003)。6.Tranwell侵袭实验显示:阴性对照组AGS/negative control穿膜细胞数为353.3±22.0个,实验组AGS/mi R-520d-5p inhibitor穿膜细胞数为个148.0±8.5,差异有统计学意义(t=-15.051,p<0.001);阴性对照组HGC-27/negative control穿膜细胞数为336.7±12.1个,实验组HGC-27/mi R-520d-5p inhibitor穿膜细胞数为224.3±17.5个,差异有统计学意义(t=-9.155,p=0.001)。以上结果表明:降低mi R-520d-5p表达水平可以抑制胃癌细胞的侵袭能力。7.Tranwell迁移实验显示:AGS/NC组穿膜细胞数为382.0±12.1个,AGS/mi R-520d-5p inhibitor组穿膜细胞数为个189.3±19.6,差异有统计学意义(t=-14.464,p<0.001);HGC-27/NC组穿膜细胞数为400.0±19.1个,HGC-27/mi R-520d-5p inhibitor组穿膜细胞数为215.3±16.6个,差异有统计学意义(t=-12.660,p=0.001)。以上结果表明:降低mi R-520d-5p表达水平可以抑制胃癌细胞的迁移能力。8.细胞划痕实验显示:AGS和HGC-27划痕24h后mi RNA-520d-5p抑制表达实验组细胞愈合率分别为12.24%±1.6%和9.74%±1.6%,与阴性对照组19.77%±1.4%和45.22%±4.0%比较,P<0.05,实验具显著性差异。AGS和HGC-27划痕48h后mi RNA-520d-5p抑制表达实验组细胞愈合率分别为32.82%±1.2%和40.46%±1.2%,与阴性对照组42.79%±3.3%和67.58%±2.1%比较P<0.05,实验具有显著性差异。结论1.mi R-520d-5p在胃癌组织中表达水平显著高于正常胃组织。2.降低胃癌细胞中mi R-520d-5p的表达水平,可以抑制胃癌细胞的增殖,迁移,侵袭能力,并在S期对细胞周期有阻滞作用。