秦岭大熊猫间充质干细胞分离及种质资源保存

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大熊猫是世界生物多样性保护的旗舰物种,秦岭大熊猫是大熊猫的重要亚种种群,具有独特的形态特征和遗传特性,与其他地区大熊猫相比,秦岭大熊猫则更为珍贵和濒危。间充质干细胞是组织工程、再生医学和细胞治疗领域中的理想种子细胞,是最有保护价值的大熊猫种质资源。本试验通过分离秦岭大熊猫骨髓、牙髓和脂肪间充质干细胞,并对其形态特征、干细胞特性以及多向分化潜能进行检测;同时利用HE染色观察大熊猫胎膜组织学结构,分离培养皮肤、肝脏、心肌以及脐带组织来源的成纤维样细胞,获得秦岭大熊猫间充质干细胞和组织细胞种质资源,为我国大熊猫遗传多样性的保护和临床应用以及相关科学研究提供必要的试验材料。试验结果如下:1.本试验通过组织块法和胶原酶消化法处理秦岭大熊猫骨髓、牙髓和脂肪组织后,获得了各组织来源的细胞,其形态均呈长梭形,在细胞融合度达90%时均表现出漩涡状生长状态;各细胞均在传至第10代时增殖能力减弱,衰老明显。骨髓来源细胞表达CD73、CD90、SOX-2和SCFR,不表达CD34;牙髓来源细胞表达SCFR、CD90和CD73,不表达CD34和CD31;脂肪来源细胞表达CD73、CD90和GNL3,不表达CD34和CD31。诱导分化结果显示,各组织来源的细胞均能分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞,表明本试验成功获得了秦岭大熊猫骨髓、牙髓和脂肪组织来源间充质干细胞。2.秦岭大熊猫胎膜由绒毛膜、羊膜和尿囊膜构成,绒毛膜面积最大,血管丰富,由单层纤毛柱状上皮和网状层组成;羊膜由上皮层、中间层和致密层组成;尿囊膜最薄,由单层扁平上皮、疏松结缔组织和血管组成。3.本试验通过组织块法和胶原酶消化法处理秦岭大熊猫皮肤、肝脏、心肌和脐带组织后,获得了各组织来源成纤维样细胞,其中大熊猫皮肤成纤维样细胞传代培养24 h,可达到90%以上融合度;大熊猫肝脏、心肌和脐带组织来源的成纤维样细胞传代培养48h,均可达到80%以上融合度。综上所述,本试验成功获得并保存了秦岭大熊猫不同组织来源的种质资源细胞,为秦岭大熊猫种质资源保存、临床疾病治疗及科学研究提供了物质基础。
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