长叶红砂RtF3H1和RtF3H2基因的克隆及原核表达分析

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:ironfeet
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
长叶红砂(Reaumuriatrigyna)是内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯地区特有的双子叶盐生小灌木,具有极强的耐盐抗旱性,并可以入药治疗湿疹、皮炎等疾病,具有一定的药用价值。在长叶红砂转录组测序结果中,发现大量黄酮合成相关基因在盐胁迫条件下上调表达,如CHS、F3H、FLS、DFR和LDOX等基因。黄烷酮-3-羟基转移酶(F3H)是黄酮合成途径上游的一个关键酶,在植物抵御非生物胁迫中发挥重要作用。从强旱生泌盐盐生植物长叶红砂中克隆F3H基因并验证其在非生物胁迫中的功能,将为揭示该植物黄酮合成与其强抗逆性的关系奠定基础。主要结果如下:  (1)利用RT-PCR和RACE技术获得了长叶红砂两个F3H基因的cDNA全长序列。RtF3H1序列全长1291bp,开放阅读框长1059bp,编码353个氨基酸。RtF3H2基因序列全长1305bp,其中开放阅读框长1074bp,编码358个氨基酸。  (2)RtF3H1和RtF3H2的组织特性表达结果显示:RtF3H1仅在茎中表达,在根和叶中几乎不表达;RtF3H2主要在根和茎中表达,在叶中的表达量极低。  (3)长叶红砂在盐、冷和ABA胁迫条件下,RtF3H1和RtF3H2基因的表达具有相似性,而在干旱胁迫下,这两个基因的表达存在一定差异。在盐胁迫中,两个基因在处理1h时表达量开始升高,一直持续到24h时下降;在冷和ABA胁迫下,两个基因在处理3h和12h时表达量均明显升高。在干旱胁迫下,RtF3H1基因仅在处理1h时上调表达,而RtF3H2基因在1h和3h都上调表达。  (4)构建了RtF3H1和RtF3H2基因的原核表达载体pGEX-4T1-RtF3H1和pGEX-4T1-RtF3H2,并将其导入大肠杆菌中。重组菌经SDS-PAGE电泳检测,观察到与预期大小一致的融合蛋白表达。  (5)对转RtF3H1和RtF3H2大肠杆菌抵御非生物胁迫的研究表明:RtF3H1和RtF3H2能提高大肠杆菌对盐、干旱、ABA及紫外胁迫的抗性。在盐和干旱胁迫条件下,pGEX-4T1-RtF3H2重组菌比pGEX-4T1-RtF3H1重组菌表现出更高的存活率。
其他文献
本文研究制备了红白、黄白双色微胶囊电泳显示器件。研究了改性的颜料红254、颜料黄13和颜料黄181的电泳显示液配方;优化了一步原位聚合法制备脲醛树脂微胶囊的制备工艺;探索了
前期研究结果显示,淹水胁迫下小麦胚乳细胞程序性死亡(Programmed cell death, PCD)进程整体提前;初步研究发现ROS大量累积,造成细胞结构氧化损伤和胚乳抗氧化酶活性下降,从某些方面造成胚乳PCD提前。为了进一步探寻小麦胚乳细胞程序性死亡提前的原因,本研究以华麦8号(Hua8)为材料,并于开花期对其进行淹水处理,研究了胚乳发育过程中相关caspase-like蛋白酶活性变化;通
近年来,半导体光催化技术已经广泛应用于污水处理、气体净化和新能源开发等领域。在TiO2等传统光催化材料已经不能满足人们需要的背景下,新型光催化材料的开发越来越受到人们的
本文总结传统工艺中三种制备水胶炸药的方案,分析了三种方案的利弊。在此基础上,提出了新的制备工艺,该工艺可以充分利用能量,这样不仅可以提高生产效率,还提高了生产的安全