论文部分内容阅读
卵母细胞发育调控是鱼类生殖生理学的重要核心内容。卵成活率的高低一直是评价水产养殖业的一个主要的客观因素，而卵母细胞最终成熟是卵子排出、成功受精的关键步骤。本研究采用卵母细胞体外培养实验和荧光实时定量 PCR技术对鲤鱼卵母细胞最终成熟分子机制及相关内分泌干扰物对鲤鱼卵母细胞最终成熟过程影响的分子机制进行了研究。主要结果如下： 1.分析了在不同化合物培养下卵母细胞发生GVBD的情况。结果表明，DHP可直接促进鲤鱼卵母细胞的最终成熟；DES可能为DHP类似物，与DHP有着相似的作用，同样可直接促进鲤鱼卵母细胞的最终成熟；DEHP在单独作用时，对鲤鱼卵母细胞成熟有一定的抑制作用或没有作用，但在加入DHP后，该抑制作用被很大的削弱。 2.运用Bestkeeper、geNorm、NormFinder、RefFinder等软件筛选了不同化合物暴露下卵母细胞最终成熟过程中表达最稳定的内参基因。结果表明，EF1α是DHP和DES诱导卵母细胞最终成熟过程中表达最稳定的基因；gapdh是DEHP诱导卵母细胞最终成熟过程中表达最稳定的基因。经各候选内参基因分析LHR基因在DHP诱导卵母细胞最终成熟过程中的表达情况表明，在特定试验条件下，最佳内参的筛选对于准确分析目的基因表达非常重要。 3.研究了DHP、DES和DEHP对鲤鱼卵母细胞最终成熟过程中涉及的一些相关基因表达的影响。1）cyp19、mPRγ、LHR、cdc2和cyclin B基因随着DHP诱导时间的延长，表达量显著增加。20β-HSD基因在整个DHP诱导过程中表达量都很低，IGFBP2基因表达量则随着诱导时间的延长表现为先增加后减少。2）在不同浓度DES诱导卵母细胞最终成熟过程中，0.1μmol/L DES除对cdc2和cyclin B基因表达无促进作用，对其它几个基因都有促进作用。1μmol/L DES显著诱导cyp19、LHR、mPRγ、cdc2、cyclin B和IGFBP2基因的表达。2μmol/L DES可促进mPRγ、LHR、cyp19和IGFBP2的表达。3）在不同浓度DEHP诱导卵母细胞最终成熟过程中，先加不同浓度DEHP，4h后加DHP培养时，DEHP单独作用对所有基因都有抑制作用，DEHP浓度越高，该抑制作用越强，而在4h加入DHP后，这种抑制作用被减弱，转而由DHP作为主导；DEHP和DHP共同存在时，DEHP对这些基因的抑制作用会相对减弱。 4.论文分析了DHP、DES和DEHP影响鲤鱼卵母细胞最终成熟过程中一些基因的共表达关系。发现20β-HSD、mPRγ和LHR三个基因共表达；mPRγ、cdc2和cyclin B三个基因也显著共表达。上述基因的共表达关系与这些基因在卵母细胞最终成熟中的功能是密切相关的。