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心肌纤维化是高血压心脏重塑的重要病理改变之一。业已证实，心肌纤维化导致心脏顺应性降低，僵硬度增加，心脏功能下降。新近研究表明，高血压心肌纤维化伴随有冠状动脉周围和心肌间质的单核细胞的浸润。这种现象提示炎症反应可能也是高血压心肌纤维化的原因之一。迄今为止，炎症反应在高血压心肌纤维化中的作用尚未阐明。心肌组织中单核细胞浸润的机制尚不清楚。单核细胞趋化蛋白-1(mononuclear chemotaxis protein-1，MCP-1)是CC型趋化蛋白的一种，对单核细胞有特异性的趋化作用。MCP-1可能是引起心肌组织中单核细胞浸润的原因之一。转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)在多种类型的组织纤维化过程中起着重要的作用。单核细胞是多种组织内TGF-β的重要来源之一。核转录因子-κB(nuclear transcript factor-κB，NF-κB)在多种组织炎症反应中起重要介导作用，其对成纤维细胞分泌MCP-1的作用尚不明确。本研究课题观察MCP-1在高血压大鼠心脏中的表达，研究MCP-1与TGF-β的关系，探讨MCP-1对高血压心肌纤维化中的影响，旨在阐明MCP-1在高血压心肌纤维化中的作用机制，为防治高血压心肌纤维化和高血压左室肥厚提供理论依据和新的途径。 本研究以高血压心肌纤维化动物为实验模型，以培养的成年大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)和分离的大鼠单核细胞为研究对象。 第四军医大学博士学位论文采用逆转录聚合酶链反应(Rl’- PCR)，蛋白免疫印迹(westem blot)，酶联免疫吸附(ELISA)，免疫组化，四哇盐(MTT)比色试验，图像分析等实验方法，分别观察:(l)一氧化氮合酶(nitrie oxides”thase，Nos)对高血压大鼠心肌纤维化的影响;(2) NOS对高血压心肌纤维化大鼠心肌内MCP一1和TGF一p mRNA水平的影响;(3)血管紧张素11对成年大鼠CFs表达MCP一l的影响;(4)NF一KB抑制剂对成年大鼠CFS表达MCP一1的影响:(5)血管紧张素11对成年大鼠CFs内NF一KB的影响;(6) TGF一p对成年大鼠CFs胶原合成和细胞增殖的影响。(7)单核细胞对成年大鼠CFs胶原合成和细胞增殖的影响。 研究结果显示:(l)慢性阻断一氧化氮合酶活性显著升高大鼠尾动脉压，左旋硝基精氨酸甲醋(N叱nitro一L一雌inine methyl ester，L一 NAME)+C即toril组每个时间点的血压与对照组比较无显著性差异。(2)慢性阻断一氧化氮合酶活性可引起心脏间质纤维化和血管周围纤维化。7天组、14天组和28天组的胶原容积分数(eollagen volume fraetion，CVF)分别为4.45%士0.20%、5.42%士0.68%和7.02%士0.82%，与对照组(3.12%士0.08%)比较均有显著性差异(p<0.05);L一NAME+Captoril组的CVF为3.14%士0.11%，与对照组(3.12%士0.08%)无显著差异。7天组、14天组和28天组的血管周围胶原面积(P erivaseular eollagen area，pVCA)分别为0.85%士0.09%、1 .18%士0.16%和1.52%士0.20%，与对照组(0.51%士0.05%)比较均有显著性差异(p<0.05)，L一NAME+Captoril组的pVCA为0.53%士0.07%，与对照组(0.51%士0.05%)比较无显著性差异 (P>0 .05)。(3) MCP一1 mRNA水平在给药后第3天即有明显升高，随后逐渐下降。3天组、7天组，14天组和28天组的的MCP一1 mRNA的水平分别为0.82士0.12、0.38士0.06、0.31士0.05和0.22士0.02，与对照组(0.11士0.01)比较均有显著性差异(p<0.05)，L一NAME+e即toril组MCp一lm胭A的水平为0.12士0.02，与对照组(0.11士0.01)比较均无显著性的差异(P>0 .05)。(4) TGF一plllRNA水平在给处理后7天显著升高，随后维持于较高水平直至第28天。7天组、14天组和28天组TGF一p mRNA的水平分别为1.13士0.08、1.52士0.17和1.46士0.12，与对照组(0.18士0.02)比较均有显著性差异(P<0.05)，3天组TGF一p mRNA的水平为0.21士0.03，与对照组( 0.18士0.02)比较无显著性差异(p>0.05)。L一AME+eaptoril一4一 第四军医大学博士学位论文组TGF一p mRNA的水平为0.20士0.03，与对照组(0.18士0.02)比较均无显著性的差异(P>O.05)。(5)随着血管紧张素n刺激浓度的增加和刺激时间的延长，细胞内和上清中MCP一1的表达量也逐渐增加。在lx10一1 lmol几、1 x 10一gmo比、1 x 10·smol/L、1 x 10一7mol几、1 x 10一6mol/L的血管紧张素11作用下，上清中MCP一1的含量分别为1 .60土0.21 ng/nll、3.18士0 .1 sng/ml、4.70士0.22ng/ml、9.18士0.52 ng/ml、8.75士0.42 ng/ml，与对照组(1.13士0.ogng/ml)比较，除IXlo一llmol/L组外，均有显著性差异(P<0.05)。(6)在1 x 10一，mol/L的血管紧张素11作用下，3h、6h、12h和24h MCP一l的表达量分别为2.13士o.31ng/ml，3.25士0.20ng/ml，5.28士0.50ng/ml和9.18士o，52ng/ml，与空白对照组(1.13士0.09ng/ml)比较均有显著差异(P<0.05)。血管紧张素n+Losartan刺激后所得的MCP一1浓度为，Losartan组测得的MCP一1浓度为1 .18士o.12ng/ml。与对照组(l .13士0.09n留ml)比较，血管紧张素n组、血管紧张素n+Losartan组均有显著性差异(P<0.05)，而Losartan组无显著性差异(P>.05)。血管紧张素H十PD