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目标本研究旨在深入研究重组病毒AdV-SMS2介导的鞘磷脂合酶2(sphingomyelin synthase2, SMS2)过表达对载脂蛋白E(Apo E)KO小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。背景血浆SM浓度升高是冠心病独立危险因素。SMS在体内有两个同工酶SMS1和SMS2,后者位于细胞膜上,与脂质代谢相关的众多受体联系紧密。本教研室前期研究已初步证实,SMS2活性升高可导致多项动脉粥样硬化(AS)密切相关的生化指标向潜在致AS方向发生改变并引起主动脉斑块面积增加。然而,近期对年迈死者的解剖发现大多数人到晚年时,血管壁都或多或少有斑块形成,但并没有明显症状。斑块损伤、血栓形成是心脑血管急性事件(ACE)的真正元凶。因此,控制斑块大小和稳定性、防止易损斑块损伤在动脉粥样硬化疾病的防治中尤为重要。本课题在前期研究基础上将进一步深入探索SMS2过表达与AS斑块稳定性之间的关系。方法本课题利用本实验室前期构建的携带SMS2基因表达框的重组V型腺病毒(AdV-SMS2)为工具,转染ApoE KO小鼠,建立小鼠肝脏SMS2过表达模型,以携带报告基因GFP的重组腺病毒(AdV-GFP)转染的ApoE KO小鼠作为对照组,分别给予高脂饲养,通过对动脉粥样硬化斑块的形态学分析,对斑块稳定性密切相关的重要因子如单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2),环氧化酶-1和-2(cyclooxygenase-1,-2; COX-1,-2),组织因子(ti ssue factor, TF)等基因水平和蛋白水平的生化检测,以及对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPC)数量和功能分析,重点研讨SMS2与AS斑块稳定性之间的关系,以确定SMS2可否作为新靶点,控制AS斑块稳定性,降低急性心血管事件(acute cardiovascular events, ACE)发生的概率。结果实验结果显示,与AdV-GFP组相比,NMS2过表达导致：1.肝SMS2mRNA水平增加2.5倍(p<0.001)；肝SMS总活性增加2.3倍(p<0.001)；血浆LDL-C增加1.48倍(p<0.05)；血浆HDL-C降低29%(p<0.05)；SM/PC增加1.5倍(p<0.05)；2.小鼠主动脉弓AS斑块面积增加1.7倍(P<0.001),整条主动脉AS斑块面积增加1.2倍(P<0.001)；3.小鼠主动脉根部死亡核心面积增加1.6倍(P<0.001)；胶原含量减少17%(P<0.001);4.MMP-2,MCP-1和TF的mRNA和蛋白表达水平显著提高(P<0.001)；5.COX-2的mRNA和蛋白表达水平显著升高(p<0.001)；与之相反,COX-1的mRNA和蛋白表达水平则显著下降(p<0.001)；6.外周血中的EPC的数量显著减少(p<0.001)；内皮祖细胞克隆形成单位数量减少40%(p<0.05)。结论不稳定斑块最明显特征是具有脂核增大、纤维帽变薄、炎症活动增强、内皮功能异常和凝血机制激活等特点。本研究发现,腺病毒介导小鼠肝脏SMS2过表达导致主动脉根部斑块坏死核心面积增大,主动脉根部胶原含量降低；促动脉粥样硬化的炎症因子如MCP-1,TF,MMP-2,COX-2的表达显著升高；COX-1的表达,外周血内皮祖细胞的数量和功能均显著下降。以上结果表明,SMS2过表达可促动脉粥样硬化,加剧斑块不稳定性。因此,SMS2有望成为新靶点,抑制SMS2活性可能是稳定AS斑块,防止易损斑块损伤,降低ACE风险的新选择。