【摘 要】
：
传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一类具有高度传染性的免疫抑制病。该病主要侵袭雏鸡的法氏囊等器官,造成法氏囊充血、出血、肿大等病理变化。该病传播迅速,伴随着新型毒株的出现,传统的经典疫苗无法对感染IBDV的鸡实施全面保护。特异性高、操作简便、可大批量检测
【基金项目】
：
IBDV靶向树突状细胞病毒样颗粒疫苗的设计及其免疫原性的研究（212102110092）； IBDV病毒样颗粒诱导树突状细胞成熟与迁移的免疫机制研究（3180120355）；
论文部分内容阅读
传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一类具有高度传染性的免疫抑制病。该病主要侵袭雏鸡的法氏囊等器官,造成法氏囊充血、出血、肿大等病理变化。该病传播迅速,伴随着新型毒株的出现,传统的经典疫苗无法对感染IBDV的鸡实施全面保护。特异性高、操作简便、可大批量检测的ELISA检测方法可用于检测接种的鸡群,以评价疫苗的免疫效果,对IBD的防控具有重要意义。为建立检测IBDV疫苗血清的竞争ELISA方法,本研究以IBDV B87株的VP2蛋白作为包被抗原,主要内容分为以下三部分:1.IBDV VP2蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定。将重组质粒p ET28a-VP2转化至BL21（DE3）p Lys S感受态细胞,构建重组菌,优化表达条件,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表明VP2蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白与His单抗和IBDV标准阳性血清均能够特异性结合,具有良好的反应原性。通过亲和层析纯化可获得VP2蛋白,利用梯度透析对VP2蛋白复性,复性后的VP2蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,可得到条带单一、具有良好特异性反应的VP2蛋白,纯度可达约98%。2.IBDV VP2蛋白单克隆抗体的制备。将复性后的VP2蛋白免疫Balb/C小鼠,血清效价可达到1:128000。通过杂交瘤细胞技术筛选出4株单克隆抗体（2B4-3、5A2-1、6G6-2、9H5-2）,亚型鉴定结果显示,单抗9H5-2的重链为Ig G2b,2B4-3、5A2-1、6G6-2的重链为Ig G1,且所有的轻链均为Kappa。Western-blot和IFA结果显示,4株单克隆抗体均可与原核表达的抗原发生特异性反应,且能和IBDV感染的细胞发生特异性免疫荧光反应,为后续检测IBDV疫苗血清的竞争ELISA方法的建立提供了基础。3.检测IBDV疫苗血清的竞争ELISA方法的建立。通过棋盘法确定抗原最佳包被浓度和单克隆抗体最佳稀释度,确定血清最佳稀释倍数,优化二抗稀释倍数、封闭条件、底物作用时间,利用SPSS软件统计30份阴性样本,确定了临界值为55.73%,建立了一种IBDV VP2蛋白竞争ELISA检测方法,特异性试验结果显示,该方法与IBDV阳性血清发生特异性反应,而与H7N9阳性血清、ADV阳性血清、MDV阳性血清均未出现交叉反应,表明具有良好的特异性;当标准阳性血清稀释度为1:10时,该方法具有较好的敏感性;重复性试验结果表明该方法的批内与批间变异系数均小于15%;符合率试验结果表明,该方法与IDEXX-IBDV试剂盒的符合率为96.68%,表明本研究建立检测IBDV疫苗血清中抗体的竞争ELISA方法可用于评价IBDV疫苗。
其他文献
秸秆还田、氮肥施用与水分管理对水稻的生长发育、产量与品质形成有重要影响。秸秆还田下氮肥和干湿交替灌溉对稻米品质影响的研究较多,但多基于小麦秸秆还田,有关油菜秸秆还田条件下施氮比例、干湿交替灌溉等栽培措施对水稻产量、品质和及其形成机制的报道较少。因此,本研究以水稻品种南粳9108、淮稻5号为材料,研究了在小麦、油菜秸秆还田条件下,不同施氮比例以及穗分化期干湿交替灌溉处理对水稻产量和品质的影响,以期为
＜正＞建设创新型国家和制造业强国都迫切需要提高全民族的创新意识和工程素养。了解历史上重大的技术创新的产生背景和实现过程非常必要，尤其需要了解工程思想和工程师在其中所起的重要作用《思维决定创新：20世纪改变美国的工程思想》讲述的是1920年以来改变美国乃至世界的一系列重要的技术创新，以及这些创新从产生到实现的全过程。这些创新既包括了美国的大型公共工程，例如胡佛大坝、高速公路以及登月工程，也包括了晶体
＜正＞清华大学五道口金融学院前身为中国人民银行研究生部,作为中国改革开放的历史见证者和推动金融体制发展变革的身体力行者,"五道口"始终挺立潮头,因为精英云集、人才辈出而享誉业界。2012年3月,清华大学与中国人民银行携手建立了清华大学第十七个学院——清华大学五道口金融学院。一直以来,"五道口"锐意进取,砥砺前行,遵循国际最先进的金融学科和商学院高等教育模式办学,打造国内领先、国际一流的金融高等教育
充分挖掘思想政治元素，将思政要点贯穿到项目任务中，实现全方位育人，推动“三全育人”，是当前高等教育教学模式改革的研究热点。该文以《嵌入式开发系统》课程为例，引入实际生活案例“药品配送机器人”，将专业知识与思想政治教育有机结合，有效的突出此类专业课程的育人价值。
以人教版九年级化学“我们周围的空气”单元复习课为例,依据义务教育化学课程标准（2022版）,结合课标有关化学核心素养的要求,通过千姿百态的化学物质、求真务实的科学探究、绚丽多彩的化学反应三个环节,帮助学生重构认知体系,引导学生构建研究物质的一般思路和方法的模型,帮助学生初步建立从化学视角认识物质的科学思维和分类的思想观。
＜正＞鸡传染性法氏囊病（IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性的传染病；鸡传染性贫血病（CAV）是由鸡传染性贫血病毒引起的，病鸡表现为贫血、骨髓黄染、免疫机能受损。IBD和CAV均可直接导致病鸡死亡、鸡群生产性能降低，还可导致鸡群免疫抑制，进而促使鸡群并发或继发其它疫病。2018年6月份，河北某养殖场所饲养的蛋雏鸡发生了一种疫病，发病鸡以精神沉郁、蓝翅、死淘率高为主要
传染性法氏囊病毒（IBDV）VP2蛋白具有良好的免疫源性。本研究用纯化的IBDV NN1172株与弗氏佐剂混合，经腹腔注射途径免疫5周龄BALB/c小鼠，3次免疫后，对小鼠进行眼眶采血，用ELISA方法鉴定VP2抗体水平，用抗体水平最高小鼠的脾细胞与SP2/0进行融合后，对融合成功的杂交瘤细胞经亚克隆后获得1株传代稳定的单克隆细胞株-2G5（重链IgG2a型，轻链为κ型），经ELISA、IFA及W
“六郁”，首见于元代朱丹溪《丹溪心法·六郁》，即气郁、湿郁、痰郁、热郁、血郁、食郁。糖尿病前期属中医学“脾瘅”范畴，六郁是脾瘅发病的重要病机。该文从六郁出发，探析六郁在糖尿病前期发病过程中的重要作用，并结合历代医家及当代诸多医者的经验，以解郁之法治疗糖尿病前期。
传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldisease virus,IBDV）引起鸡的一种急性、高度传染性疾病。IBDV主要侵害禽类法氏囊中未成熟的B淋巴细胞,引起受感染鸡的组织损伤和免疫抑制,甚至免疫失败,并增加对条件致病菌和其他传染病的易感性。20世纪80年代末,IBDV超强毒株（Very virule
鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是一种急性、高度传染性的免疫抑制病,给全球家禽养殖业造成了巨大的经济损失。其病原体为传染性法氏囊病病毒（IBDV）,主要分为2种血清型,其中只有血清I型对鸡具有致病性。IBDV至今发生过两次变异,相继出现了经典株（Classical IBDV,c IBDV）、减毒株（Attenuated）、变异株（Variant IBD