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目的:通过明确HIF-1ɑ介导的线粒体自噬与骨细胞凋亡之间的相互作用,探讨右归饮抑制SANFH骨细胞凋亡的作用机制是否与HIF-1ɑ介导的线粒体自噬相关,从而为中医药防治SANFH提供可靠的理论及实验依据。方法:本研究分为三个部分,均采用体外培养MLO-Y4骨细胞进行实验。实验一通过采用Western blot检测MLO-Y4骨细胞在常氧及低氧下不同浓度(1μM、10μM、100μM)地塞米松对HIF-1ɑ介导的线粒体自噬相关蛋白BNIP3、LC3的表达影响,明确激素对HIF-1ɑ介导的线粒体自噬的影响。实验二共分为六组,A组(空白对照常氧组)、B组(空白对照低氧组)、C组(低氧下MLO-Y4转染HIF-1ɑ过表达组)、D组(低氧下MLO-Y4转染HIF-1ɑsiRNA组)、E组(低氧下MLO-Y4转染HIF-1ɑ过表达+10μM地塞米松组)、F组(低氧下MLO-Y4转染HIF-1ɑsiRNA+10μM地塞米松组),通过采用Western blot检测各组HIF-1ɑ及下游线粒体自噬相关蛋白BNIP3、LC3表达水平,并采用流式细胞仪检测各组MLO-Y4骨细胞凋亡情况,从而明确HIF-1α介导的线粒体自噬与SANFH骨细胞凋亡之间的相互作用。实验三将MLO-Y4骨细胞分为三组,即空白组、激素组(10μM地塞米松)、右归饮组(10μM地塞米松+右归饮),通过采用Western blot检测三组HIF-1ɑ、BNIP3、LC3的表达水平,并采用流式细胞仪检测其细胞凋亡情况,明确右归饮抑制SANFH骨细胞凋亡的作用机制是否与HIF-1ɑ介导的线粒体自噬相关。结果:(1)在常氧下MLO-Y4骨细胞线粒体自噬相关蛋白HIF-1α、BNIP3及LC3表达水平均较低,当加入1μM地塞米松后,HIF-1α的表达水平明显增加,BNIP3及LC3蛋白表达水平与HIF-1α蛋白表达趋势基本一致,差异均具有统计学意义(P<0.05);当地塞米松浓度增至10μM、100μM时,HIF-1α、BNIP3、LC3蛋白表达水平均较1μM时明显下降,且呈下降趋势,差异均具有统计意义(P<0.05)。在低氧环境下MLO-Y4骨细胞线粒体自噬相关蛋白HIF-1α、BNIP3、LC3表达水平均较高,但随着地塞米松浓度的不断增加,其蛋白表达水平均逐渐降低。(2)B组HIF-1α、BNIP3及LC3蛋白表达均较A组明显增加,其MLO-Y4骨细胞凋亡率显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);C组HIF-1α、BNIP3及LC3蛋白表达均较B组显著增加,骨细胞凋亡率显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);D组HIF-1α、BNIP3表达水平较B组均明显降低,骨细胞凋亡率明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),LC3的蛋白表达水平较B组稍有降低,但无统计学差异(P>0.05);E组HIF-1α、BNIP3及LC3的蛋白表达水平均较C组明显下降,骨细胞凋亡率显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);F组BNIP3蛋白表达水平较D组显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05),HIF-1α、LC3蛋白表达水平较D组均降低,但无统计学差异(P>0.05),骨细胞凋亡率较D组显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);E组HIF-1α、BNIP3、LC3的蛋白表达水平均明显高于F组,细胞凋亡率显著低于F组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。(3)激素组HIF-1α、BNIP3及LC3蛋白表达水平均较空白组显著降低,骨细胞凋亡率显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);右归饮组HIF-1α、BNIP3、LC3蛋白表达水平均较激素组明显增加,细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:激素浓度的增加可明显抑制HIF-1α介导的骨细胞线粒体自噬的表达,提高HI F-1α的表达可明显增加骨细胞线粒体自噬的发生,抑制激素造成的骨细胞凋亡。右归饮可明显提高HIF-1α介导的骨细胞线粒体自噬水平,从而保护暴露激素下的细胞免受凋亡。本研究明确了右归饮防治SANFH的部分机制,为临床提供了可靠的实验依据。但其具体通路仍需进一步实验证明。