【摘 要】
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目的:筛选脑出血后差异表达的mRNA及miRNA。验证miR-200b、Lpar1在小鼠脑出血模型和LPS诱导的小胶质细胞炎症模型中的表达,并探讨miR-200b、Lpar1之间及miR-200b与促炎因子之间的关系。方法:将C57BL/6小鼠采用简单随机方法分为假手术组（sham组）、脑出血组（ICH组）,建立小鼠脑出血后继发性脑损伤模型,取3只正常组小鼠和3只ICH组小鼠处理侧基底节区脑组织通
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960230）；
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目的:筛选脑出血后差异表达的mRNA及miRNA。验证miR-200b、Lpar1在小鼠脑出血模型和LPS诱导的小胶质细胞炎症模型中的表达,并探讨miR-200b、Lpar1之间及miR-200b与促炎因子之间的关系。方法:将C57BL/6小鼠采用简单随机方法分为假手术组（sham组）、脑出血组（ICH组）,建立小鼠脑出血后继发性脑损伤模型,取3只正常组小鼠和3只ICH组小鼠处理侧基底节区脑组织通过二代测序方法进行测序分析。利用R软件找出差异表达的mRNA和miRNA。利用STRING数据库对明显上调差异表达的基因编码蛋白构建相互作用网络（PPI）,分析网络中蛋白蛋白之间的相互作用关系,并采用Cytoscape软件筛选网络中关键基因簇的关键基因并构建相关性网络。采用miRDB和Target Scan公共数据库对关键基因的上游可能结合的miRNA进行预测,同时将本次研究确定的关键基因与差异表达的miRNA行person相关性分析,最后与关键基因呈负相关的miRNA取交集。为了验证前期生物信息学分析的相关结果,我们通过建立体外BV-2小胶质细胞炎症模型及1、3、7天脑出血模型验证。最后通过q PCR检测关键基因Lpar1、miR-200b和IL-6、IL-1β、TNF-α的相对表达水平。结果:通过生物信息学分析,我们对ICH组小鼠及正常组小鼠对比分析共得到969个差异表达mRNA和106个差异表达的miRNA,与正常组小鼠相比,ICH组小鼠中mRNA有545个下调表达和424个上调表达,miRNA有55个下调表达和51个上调表达。通过对上调差异表达基因的蛋白互作网络构建及利用Sytoscape软件中的“MODE”插件确定互作网络中的关键基因簇,最终确定上调表达的Lpar1为感兴趣的关键基因。通过miRDB和Target Scan数据库预测发现下调表达的miR-200b可能与Lpar1靶向结合。在体内和体外模型中,分别和正常组和对照组相比,ICH组小鼠和LPS处理的小胶质细胞中Lpar1相对表达水平升高、miR-200b相对表达水平降低（P<0.05）,ICH组建模后1、3、7天miR-200b的相对表达分别为0.52±0.07、0.38±0.06和0.40±0.04,Lpar1的相对表达分别为2.05±0.12、2.97±0.11和2.96±0.09,LPS诱导的小胶质细胞炎症模型的miR-200b和Lpar1表达分别为0.55±0.06和2.93±0.38。Lpar1和miRNA-200b的表达水平呈负相关关系。在小胶质细胞炎症模型中,过表达miR-200b后与对照组相比IL-6、IL-1β、TNF-α相对表达水平降低,他们的相对表达分别为2.16±0.26、2.62±0.39和2.27±0.31（P<0.05）。结论:在小鼠ICH中,Lpar1高表达,miR-200b低表达。在BV-2小胶质细胞炎症模型中,过表达miR-200b可抑制小胶质细胞炎症反应。
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