EGCG对膀胱尿路上皮癌细胞自噬调控及机制的研究

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目的:探讨表没食子儿茶素3-没食子酸酯(EGCG)对膀胱尿路上皮癌细胞自噬的作用,及其相关机制研究。方法:1.膀胱癌5637、T24细胞通过MTT实验筛选出EGCG的最佳作用浓度。2.膀胱癌5637、T24细胞通过三种不同浓度的EGCG处理24h后,通过流式双染检测对细胞凋亡的影响。3.两株膀胱癌5637、T24细胞通过不同浓度的EGCG处理后,用Western Blot检测凋亡及自噬相蛋白Caspase3、Caspase9、Bax、Bcl2、Beclin1、LC3B等的表达水平4.两株膀胱癌5637、T24细胞分别经EGCG处理以后,通过透射电镜检测各细胞分组的自噬情况。5.Western Blot检测EGCG处理后的膀胱癌5637、T24细胞p-AKT及p-mTOR的表达。6.膀胱癌T24细胞通过MTT实验筛选PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂RAPA的最佳作用浓度生长。7.膀胱癌细胞T24在PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂RAPA以及EGCG处理24h后,通过流式双染检测对细胞凋亡的影响。8.选择LY294002、RAPA浓度预处理T24细胞24h,撤去LY294002、RAPA后,选择EGCG低浓度(9mg/L)处理细胞24h,通过Western Blot检测自噬相关因子Beclin1、LC3B的表达水平。结果:在本研究中,通过EGCG处理膀胱癌5637和T24细胞后,发现EGCG可诱导膀胱癌细胞系(T24和5637细胞)增殖减慢,对凋亡相关蛋白(caspase 9,caspase 3,BAX)表达呈剂量依赖性增加,并增加了自噬相关蛋白(LC3B和Beclin1)的表达;通过TEM,我们发现EGCG处理显著增加了T24和5637细胞的自噬体形成,在低剂量时更加显著。此外,EGCG还可降低p-AKT、p-mTOR的表达。与PI3K/AKT抑制剂、mTOR抑制剂协同作用于膀胱癌T24细胞后,流式细胞术结果发现膀胱癌T24细胞凋亡率增加,Western Blot提示自噬相关蛋白的表达增强。结论:1.EGCG能抑制膀胱癌细胞生长,促进膀胱癌细胞凋亡。2.EGCG可能上调自噬相关蛋白,诱导膀胱癌细胞自噬。3.EGCG可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路诱导膀胱癌自噬和促进凋亡。
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