角质细胞生长因子KGF来源于人肺成纤维细胞，属成纤维母细胞生长因子家族成员。它由间质细胞产生，并通过旁分泌方式作用于上皮细胞表面的角质细胞生长因子受体KGFR,刺激上皮细胞有丝分裂和分化。KGFR位于上皮细胞内，具有酪氨酸激酶活性，是FGFR2的剪接变体，即FGFR2Ⅲb。它可与FGF1、FGF3、KGF、FGF10结合而发挥其生理效能。研究发现KGF、KGFR与一系列上皮源性肿瘤的发生发展有关，它们参与肿瘤细胞增殖、迁移及抑制肿瘤细胞凋亡等活动。近年国外有文献报道在宫颈癌上皮细胞中KGF／KGFR的表达较正常宫颈上皮细胞中的表达明显增高，推测其可能与宫颈癌的发生发展有关。目前国内外普遍认为人乳头瘤病毒(HPV)与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌密切相关。临床上发现，HPV感染会引起宫颈发生程度不一的各种病变，但仅有部分感染这些病毒的患者最终发展为宫颈癌。因此，宫颈癌的发生发展除HPV感染为主要的病因外，还有其它多种因素的参与。在一些肿瘤的研究中发现KGF／KGFR能促使肿瘤细胞的增殖、迁移并抑制肿瘤细胞凋亡。在宫颈癌上皮组织中KGF／KGFR是否有高表达?目前文献报道较少；KGF／KGFR在宫颈癌中的作用，对宫颈癌细胞的增殖、迁移、凋亡是否有影响，还未见文献报道。本课题就KGF、KGFR与宫颈癌的关系作一探讨。目的：确定角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在正常宫颈组织、宫颈癌组织、Hela、CaSki细胞中有无表达；了解KGF、KGFR对Hela、CaSki细胞增殖、迁移、凋亡有无影响。方法：1、采用免疫组织化学方法分别对正常宫颈组织(22例)和宫颈癌组织(31例)中KGF、KGFR的表达进行测定，比较正常宫颈组织和宫颈癌组织中KGF、KGFR的表达有无差异。2、采用半定量PCR方法在mRNA水平确定KGF/KGFR在Hela细胞和CaSki细胞中的表达；采用ELISA、Western blot方法在蛋白水平分别测定KGF、KGFR在Hela、CaSki细胞中的表达。3、~3H-TdR掺入试验测定人重组KGF对Hela、CaSki细胞、增殖的影响；~3H-TdR掺入试验、MTT测定KGF抗体、KGFR抗体对Hela、CaSki细胞增殖的影响。4、Millicell小室测定法测定人重组KGF、KGF抗体、KGFR抗体对Hela、CaSki细胞迁移的影响。5、流式细胞术、~3H-TdR掺入试验检测KGF对顺铂诱导Hela细胞凋亡的影响。结果：1、正常宫颈上皮细胞无KGF和KGFR表达，但宫颈癌上皮细胞中KGF和KGFR表达明显，二者在宫颈癌上皮细胞中的表达率分别为45％和71％；在Ⅱa期宫颈癌中KGF、KGFR的阳性表达率高于原位癌(P＜0.05)，但Ⅰb期宫颈癌与原位癌及Ⅰb期和Ⅱa期宫颈癌中KGF、KGFR的表达在统计学上无差异(P＞0.05)。宫颈癌出现深部间质浸润时KGF、KGFR的阳性表达率高于浅部间质浸润者(P＜0.05)；KGF在低分化宫颈癌上皮细胞中的阳性表达率高于中、高分化宫颈癌(P＜0.05)；KGFR在低分化宫颈癌上皮细胞中的表达与高、中分化的宫颈癌相比，无统计学差异(P＞0.05)；KGF与KGFR之间的表达呈正相关(r=0.9988，P＜0.05)；在正常宫颈间质及宫颈癌间质中有少量KGF和KGFR表达，经统计学处理，二者表达无差异(P＞0.05)．2、在mRNA水平、蛋白水平证实KGF及KGFR在Hela、CaSki细胞中均有表达：RT-PCR测得Hela、CaSki细胞中KGF在143bp左右有特异条带，KGFR在152bp左右有特异条带；Hela细胞中KGF蛋白表达量为1.57±0.12pg/μg，CaSki细胞中KGF蛋白表达量为1.20±O.11pg/μg；Western blot测得Hela、CaSki细胞KGFR在蛋白水平有表达：在105KD处有清晰条带。说明KGF在Hela、CaSki细胞中有自分泌现象。3、KGF、KGFR对Hela，CaSki细胞增殖的影响：人重组KGF因子能使Hela、CaSki细胞增殖增强，并呈现一定的剂量依赖性。在加入人重组KGF因子浓度为50ng/ml和lOOng/ml两组中，Hela、CaSki细胞的增殖与对照组相比差异显著(P＜0．05)；而加入2μg/ml KGF抗体和KGFR抗体后则能抑制Hela、CaSki细胞增殖，与对照组相比存在差异(P＜0.05)。4、KGF、KGFR对Hela、CaSki细胞迁移的影响：在相同时间内，加入KGF 50ng/ml能使Millicell-PCF聚碳酸酯微孔膜下层的Hela、CaSki细胞数与对照组相比增多(P＜0．05)；而加入2μg/ml KGF抗体和KGFR抗体后，聚碳酸酯微孔膜下层的Hela、CaSki细胞数与对照组相比减少(P＜0.05)；说明KGF能促使Hela CaSki细胞迁移，而且KGF对CaSki细胞迁移的影响大于Hela细胞；KGF抗体、KGFR抗体可抑制Hela CaSki细胞的迁移。5、KGF对Hela细胞凋亡的影响：经顺铂10μg/ml或KGFl00ng/ml+顺铂10μg/ml处理的两组Hela细胞，前者细胞凋亡率为20％；后者为10％，后者亚G1期峰明显低于顺铂单独处理组，提示KGF抑制了顺铂对Hela细胞的凋亡作用。~3H-TdR掺入试验发现KGF 100ng/ml+顺铂10μg/ml组与顺铂10μg/ml组相比前者能使顺铂对Hela细胞的凋亡作用减弱，证明KGF可抑制顺铂对Hela细胞的凋亡作用。结论：1、在正常宫颈上皮细胞中KGF和KGFR的表达为阴性，在宫颈癌上皮细胞中KGF、KGFR的表达为阳性，KGF的表达与KGFR的表达存在正相关，KGF、KGFR的表达与宫颈癌间质浸润深度、临床分期有关，KGF在低分化宫颈癌上皮细胞中的表达高于高中分化宫颈癌，这些结果均提示KGF与KGFR可能与宫颈癌的增殖、侵袭有关。2、在mRNA水平和蛋白水平证实KGF、KGFR在Hela、CaSki细胞中同时有表达，说明Hela、CaSki细胞能自分泌KGF。3、外源性KGF、自分泌KGF及KGFR对Hela、CaSki细胞增殖、迁移均有影响，KGF对Hela细胞的凋亡有影响；由此推测KGF、KGFR在宫颈癌的发生发展中可能起了一定作用。