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人血清白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）是一种药物递送的天然载体。近年来,HSA已广泛用于延长多肽药物的半衰期,取得了较大的进展。本实验室前期研究,利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库技术淘洗出一种与HSA结合力较高的小肽（称ABD6肽,LPHSHRAHSLPP,Kd值1.67μmol/L）,并成功地运用于介导GLP-1药物缓释。缓释多肽药物的途径是在HSA与多肽间引入一段高亲和HSA的结合肽,结合肽-多肽融合物与HSA可逆性结合,这种新型多肽缓释方法能延长多肽药物半衰期。本研究基于多价分子热力学原理,即△G=△G1+△G2→lnKd1+lnKd2→Kd1×Kd2,探索设计一种含ABD6肽序列的HSA亲和二价肽,在邻近ABD6肽结合HSA位点处再延伸一段HSA亲和肽,课题采用两种策略来延长ABD6肽序列以获得特异性结合HSA的二价肽。其一,利用M13噬菌体展示技术在ABD6肽序列的N端延伸5个随机氨基酸,构建噬菌体展示二价肽库,用于筛选HSA亲和二价肽。其二,利用结构生物学方法,制备ABD6肽与HSA复合物晶体,通过解析复合物晶体的三维结构,研究ABD6肽与HSA的结合机制,为合理延伸ABD6肽序列提供结构学依据。噬菌体展示二价肽文库的构建分为两个部分,一是,在噬菌体质粒M13KE中先插入ABD6肽序列,再引入5个随机氨基酸;二是,直接将ABD6肽与5个随机氨基酸的融合肽插入到M13KE中。目前已将ABD6肽序列正确插入到M13KE中。另一方面,复合物晶体制备实验,利用悬滴和座滴两种结晶方法,均获得了大量的HSA单晶体,结晶条件为150200 mg HSA,28%35%PEG3350和pH7.5,50 mmol/L磷酸钾溶液。HSA晶体浸泡在9 mmol ABD6肽溶液中很稳定,利用20%甘油与结晶液用做冷冻保护剂,该方法为进一步制备复合物晶体提供基础。本课题致力于获得特异性结合HSA的二价肽,多肽药物以非共价键与HSA结合的载药方式对开发多肽药物有促进作用,二价肽还可作为亲和配体与HSA结合,用于大规模初步纯化HSA。