目的 制备和纯化IL-18多克隆抗体;利用刀豆蛋白A建立免疫性肝纤维化模型;利用外源性IL-18和IL-18抗体对肝纤维化模型进行干预,观测干预的效果;观察用干预模型的药物血清对离体的小鼠肝星状细胞的作用,以探索作用机理。 方法 首先利用IL-18抗原经过免疫佐剂包被免疫新西兰白兔,ELISA检测免疫成功后,获取血清,经过硫酸胺浓度梯度法和DEAE-纤维素纯化,得到纯化的IL-18多克隆抗体。 其次,对ConA诱导的肝纤维化模型进行了探索,昆明小鼠35只,随机分为4组:正常组,刀豆蛋白A10mg/kg每周1次组,10mg/kg每周2次组,15mg/kg每周1次组,采用尾静脉注射方法攻击昆明小鼠,分别在第4周、第8周、第12周随机处死1-2只小鼠,留取肝组织标本行苏木精-伊红染色、纤维Masson染色,观察模型形成情况,保存肝组织行IL-18免疫组化半定量分析。 模型建立成功后,再选取昆明小鼠80只,随机分为5组,正常对照组,兔Ig6组,刀豆蛋白A组,IL-18组,IL-18抗体组,IL-18及IL-18抗体组在注射刀豆蛋白A前1/2小时分别皮下注射IL-18和IL-18抗体各10μg/只,100μg/只,兔IgG组注射兔IgG100μg/只。在第12周,随机选取8只采用眼眶采血法处死小鼠,留取血清ELISA法检测TNF-α,并留取肝组织行HE,Masson染色计算炎症活动度和肝纤维化计分,同时免疫组织化学染色观察α-SMA表达。 留取12周的药血清,作用于离体的mHSC,观察对HSC增殖和凋亡的影响,同时RT-PCR法检测MMP-2-mRNA,TIMP-1-mRNA。 结果 成功制备了IL-18抗体并纯化,IL-18抗体的效价为1:4000;