舍格伦综合征(Sjogren’s Syndrome, SS)又称干燥综合征,是一种侵犯涎腺、泪腺等外分泌腺为主的慢性自身免疫性疾病。其临床表现为涎腺功能低下、唾液分泌减少进而引起口腔干燥,从而影响义齿的就位和佩戴。舍格伦综合征的核心问题为腺体的分泌障碍,而水通道蛋白(Aquaporin, AQP)与腺体分泌密切相关。研究表明,舍格伦综合症患者,AQP的表达显著减少,导致水分转运失代偿。因此,恢复AQP1和AQP5的表达和调节,将增加唾液分泌量,为舍格伦综合征的治疗提供新的思路。所以本研究的主要目的是以AQP1和AQP5启动子为靶点筛选出可有效治疗合格伦综合症中药成分。AQP1和AQP5是涎腺细胞中特异性的水通道蛋白,本课题组成功构建了两者的启动子序列荧光素酶报告基因重组质粒,包括从-1717至+151的AQP1启动子和从-852至+111的AQP5启动子序列,然后,我们针对两靶点建立药物筛选模型,对多种天然中药进行筛选,筛选出促进涎腺分泌的药物。首先我们利用AQP1和AQP5启动子模型,从200多种中药中筛选哪些成分可显著激活AQP1和AQP5启动子的转录活性。结果显示人参和西洋参成分可显著激活AQP1启动子和AQP5启动子报告基因的活性。在此基础上,我们从蛋白表达水平检测人参和西洋参成分对AQP1蛋白表达的影响。AQP1是大小为28kD的糖基化水通道蛋白,其糖基化的AQP1蛋白大致介于40～60kD之间。AQP1蛋白原型的产生是其在细胞内累积的过程。实验结果表明,西洋参可促进AQP1蛋白原型的表达,并呈剂量依赖性。下面我们将进一步检测所筛选到的西洋参等药物对水分泌的影响。C1-是细胞中的主要阴离子,其浓度就会随细胞内水分的改变而引起瞬时变化。EYFP-H148Q-V163S与 C1-结合后荧光发生淬灭,因此我们应用EYFP-H148Q-V163S荧光法检测细胞水分泌功能,发现人参和西洋参成分可明显促进水分的分泌,与对照组相比有显著性差异。加入水通道蛋白特异阻断剂HgCl2后,水分泌功能受到明显抑制。提示西洋参成分促进水分泌是通过水通道蛋白介导的。研究发现人参的结构具有甾体类激素的特点。甾体类激素通过与胞内受体结合起作用,下面我们检测人参和西洋参成分通过与哪种受体结合发挥促进AQP1表达的作用。通过过表达ER α、ER β和AR,发现当过表达ER α时,西洋参可显著促进AQP1蛋白表达；而当基因沉默ER α时,抑制西洋参对AQP1蛋白的表达。我们以同样方法对AQP5进行检测,当过表达ER β时,西洋参可显著激活AQP5启动子生物学活性,而当基因沉默ER β时,抑制西洋参对AQP5启动子的转录活性。在此基础上,我们筛选了西洋参和人参中对AQP1和AQP5启动子起主要激活作用的组分。发现西洋参二醇、西洋参三醇和人参三醇对AQP和AQP5启动子都都具有显著激活作用。这些实验结果均证明：西洋参和人参成分是通过上调涎腺分泌的关键基因--AQP1、AQP5来调控唾液分泌,增加唾液分泌,对舍格伦综合征的治疗提供了新型分子靶向和新思路。对于指导临床应用西洋参和人参治疗舍格伦综合征,具有重要的理论意义和实际应用价值。