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目的在固有免疫识别系统中,Toll-like receptors是一类非常重要的模式识别受体。由TLRs引发的免疫反应在生理或病理状态下都能起到重要的调节作用。周围神经损伤后,神经修复缓慢且分子机制不详,故本实验利用TLR4突变型小鼠C3H/He J构建坐骨神经损伤模型,探究炎症因子的表达变化与坐骨神经修复质量和速度的关系,旨在进一步揭示TLR4介导的信号通路与坐骨神经损伤修复的关系,为神经损伤修复提供实验依据。方法C3H/He J小鼠为TLR4基因突变型小鼠;C3H/He N小鼠为野生型小鼠。实验设C3H/He J夹伤组(He J)、C3H/He N夹伤组(He N)及C3H/He N假手术组(control)。在无菌操作下,构建小鼠坐骨神经夹伤模型。实验指标检测分为急性损伤期和慢性期两个阶段进行,急性期指标分别于损伤后6h、12h、24h和48h,RT-q PCR检测损伤神经IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,Nlrp3,Nlrp6和caspase1因子基因水平的表达变化。损伤后12h和24h,Western Blot检测损伤神经p75NTR,GAP-43,NF-κB,Nlrp3,Nlrp6和caspase1蛋白水平的表达变化。慢性期指标分别于术后1周、2周、4周和8周取小鼠坐骨神经,HE染色观察炎症细胞表达及神经修复情况,在同期利用免疫组化检测GAP-43,p75NTR,Nlrp3,Nlrp6和caspase1蛋白表达情况。坐骨神经功能指数(Sciatic functional index,SFI)用来评价小鼠后肢坐骨神经运动功能恢复状况。结果急性期检测结果:RT-q PCR表明坐骨神经损伤后6h,12h和24h时,与control组相比,He N组小鼠IL-1β,IL-6,TNF-α和MCP-1的表达量显著升高(P<0.01),而He J组小鼠升高变化不明显。相比He N组与He J组小鼠,TNF-α的检测结果在同期差异显著(P<0.01)。Western blot结果显示,与He N组小鼠相比,坐骨神经损伤后的12h或24h时,He J组小鼠p75NTR蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。在Nlrp3蛋白表达没有差异,而Nlrp6蛋白表达在He J组小鼠中显著升高的情况下,caspase1蛋白表达水平在两实验组中均升高,caspase1具有不依赖Nlrp3的信号通路。慢性期测定结果:HE染色结果表明神经损伤后1周、2周、4周和8周,与He N组小鼠相比,He J组小鼠神经损伤处淋巴细胞表达较少,炎性反应较弱,且在同期通过免疫组化检测,He J组小鼠中GAP-43和p75NTR的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。Nlrp6的蛋白表达在He J组小鼠中表达较高,而Nlrp3和caspase1的表达在两实验组间没有差异。He N组小鼠和He J组小鼠的SFI评分结果显示,与He N组小鼠相比,在坐骨神经损伤后同期,He J组小鼠的SFI评分更高。结论成功构建了突变小鼠坐骨神经损伤模型,阐明在TLR4突变小鼠中可以通过减少多种炎性因子的释放,而加快小鼠坐骨神经的损伤修复。炎症小体的表达具有不依赖Nlrp3的通路,Nlrp6的表达升高可能抑制炎症反应而有利于神经修复,这为进一步探究炎症与周围神经损伤修复提供了实验理论依据。