背景 脾酪氨酸蛋白激酶(Spleen Tyrosine Kinase, Syk)是一种广泛表达在造血细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞上的蛋白质酪氨酸激酶，在细胞信号传导中起着重要的作用。Syk基因首先是从猪脾cDNA文库中分离出来的，所以称脾酪氨酸蛋白激酶，分子量为72KD，位于人类第9号染色体长臂q22上。 Syk基因被认为是候选抑癌基因，对肿瘤的生长和转移有抑制作用，我们对Syk基因在乳腺癌生长、转移过程中的作用进行了探讨。 1．候选抑癌基因syk mRNA在乳腺癌中的表达检测及其临床意义 目的 探索候选抑癌基因Syk mRNA的表达对乳腺癌生成及转移的影响。 方法 用RT-PCR检测六株乳腺癌细胞株Syk mRNA，半定量RT-PCR检测40例乳腺癌标本、正常乳腺组织及其15例良性乳房纤维瘤组织中Syk mRNA的表达。 结果 6株乳腺癌细胞株有3株Syk基因表达缺失，所有正常乳腺组织都有Syk基因的表达，而40例乳腺癌组织中只有9例表达，正常乳腺与乳腺癌组织中Syk基因表达率差异有显著性(X~2=47.4，P＜0.05)，且乳腺癌组织中Syk mRNA含量比正常乳腺组织显著降低(t=3.4，P＜0.05)。有淋巴结转移的18例乳腺癌组织中，1例有Syk基因表达，无淋巴结转移的22例乳腺癌病人中有8例检测到Syk mRNA的表达，有淋巴结转移的乳腺癌Syk mRNA的表达率和表达水平显著降低(X~2=3.77，P＜0.05，t=2.74，P＜0.05)。 结论 Syk基因的表达对乳腺癌的生长及转移可能起抑制作用。南京医科大学博士学位论文2.匆k基因蛋白表达与乳腺癌关系的研究目的探索syk蛋白的表达与乳腺生物学特征的关系方法采用s一P免疫组化法检测40例乳腺癌组织、癌旁组织中syk蛋白、既R一2、ER、PR、P53蛋白表达情况，并分析其与病理特征的关系。结果40例乳腺癌邻近正常组织中有36例Syk蛋白阳性表达，40例乳腺癌组织中有6例阳性，正常乳腺组织Syk阳性率高于乳腺癌组织(xZ一44.5，尸<0.05)。有淋巴结转移的18例乳腺癌组织没有检测到Syk蛋白的阳性表达，22例无淋巴结转移的乳腺癌组织有6例Syk蛋白阳性表达，无淋巴结转移的乳腺癌组织syk蛋白阳性表达率显著高于有淋巴结转移组(xZ一5 .63，p<0.05)。Syk蛋白表达与HER一2、p53蛋白表达呈负相关，与ER、PR蛋白表达无相关性(x胜2.14，外0.05:xZ一0.05，外0.05)。结论syk蛋白的表达抑制了乳腺癌的生长及转移，Syk蛋白的表达是 p53依赖性的。3.候选抑癌基因衡k启动子甲基化与乳腺癌发生转移的关系探讨Syk基因启动子甲基化与乳腺癌发生、转移过程的关系。 采用甲基化特异性PCR(MSP)检测六株乳腺癌细胞株、40例乳腺癌组癌旁组织及巧例乳房纤维瘤组织中Syk基因启动子甲基化情况，并分的法目方织析Syk基因启动子甲基化情况与乳腺癌的生成、转移的关系。结果6株乳腺癌细胞株中有3株检测有Syk基因启动子甲基化。40例乳腺癌旁组织及乳房纤维瘤组织未发现有Syk基因启动子的甲基化，40例癌组织中有17例检测到Syk基因启动子的甲基化，癌组织syk基因启动子甲基化率显著增高(xZ一21.3，尸<0.05)。有淋巴结转移的18例乳腺癌组织中，有14 4南京医科大学博士学位论文例Syk基因启动子甲基化，有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组(XZ一16.25，尸<0.05)。结论Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一，Syk基因启动护的甲基化可能与乳腺癌的发生、转移相关。4.裸氛乳腺癌转移模型的建立目的建立小鼠人乳腺癌自发性肺转移模型。方法将人乳腺癌细胞株MDA一MB一43552只1护/只，直接注射至10只雌性2周龄裸鼠胸部皮下，8周后处死，肉眼及显微镜下观察肺转移状况。结果8周后10只裸鼠接种部位均可成瘤，其中5只(50%)肉眼下见肺转移灶，1一4个肺转移灶/只，_显微镜下10只裸鼠均观察到肺转移。结论将MDA一MB一4 355细胞接种至裸鼠皮下可成功建立小鼠人乳腺癌自发性肺转移模型。5.syk基因的再表达对乳腺癌生长、转移影响的动物实验目的探讨Syk基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响方法5一氮一2’一脱氧胞普处理人乳腺癌细胞株MDA一MB一4355，MSP检测Syk基因的甲基化，用又卫PCR检测Syk基因的再表达，并用此处理过的细胞株和未经处理的细胞株Zx1o“/只，分别接种于裸鼠皮下，观察裸鼠成瘤率及肿瘤转移情况。结果MSP检测用5一氮一2‘一脱氧胞营处理过的人乳腺癌MDA一MB一4355细胞株，结果发现syk基因启动子没有甲基化，RT-PCR可检测到有Syk基因，用有syk基因再表达的MDA一MB一4355细胞株接种于10只裸鼠皮下，8周后有2只形成肿瘤，无1例形成肺部转移灶，而无Syk基因表达MDA一MB一4355南京医科大学博士学位论文细胞株接种的10只裸鼠都形成肿瘤，并在肺部形成转移灶，对照组的成瘤率及肺转移率显著高于治疗组(xZ=10.21，尸<0.05;xZ=19，P<0.05)。结论5一氮一2护一脱氧胞什通过去甲基化使MDA一MB一435细胞株中Syk基因再表达，Syk基因的再表达抑制了乳腺癌的生长和转移。