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本文对EGF-E4orf4的表达纯化、生物活性作进一步的探讨和研究。为了能够得到较纯的样品，首先对EGF-E4orf4的表达条件作了进一步探索，通过选择培养基、调整诱导表达时的pH值，优化表达条件得到了较纯的表达上清，使纯化相对容易，制备了较纯的EGF-E4orf4融合蛋白。在用Saos-2细胞对EGF-E4orf4的生物活性作进一步探讨方面，克隆形成实验显示，0.15μmo¨L浓度的EGF-E4orf4，对Saos-2细胞克隆形成能力有一定的抑制作用，抑制率为39.3％。3H-TdR掺入观察不同浓度的EGF-E4orf4对Saos-2细胞增殖的影响，EGF-E4orf4在浓度为62.5nmol/L时表现出抑制细胞增殖，此后随浓度增加，抑制增殖活性持续增强。用0.5μmol/LEGF-E4orf4融合蛋白作用于Saos-2细胞72h，采用BrdU抗体标记断裂的DNA片断，用流式细胞仪计数标记阳性细胞的百分比，3次实验结果显示，与未加EGF-E4orf4处理的阴性细胞相比，阳性细胞所占的百分比分别增加了38.6％、27.3％和21.9％，差别有显著性意义(P=0.028)，表明Saos-2细胞已处于晚期凋亡。动物预实验，用MDA-MB-231细胞接种BLAB/c裸鼠，制成荷瘤裸鼠，进行融和蛋白生物活性体内测定，初步结果显示：未给药裸鼠的移植肿块比给药裸鼠明显增大，且有腹腔转移肿瘤伴多处脏器及淋巴结转移；早期给药即接种肿瘤细胞次日给药比成瘤后再给药，肿瘤生长速度慢，内脏、淋巴结转移少；对于已成瘤裸鼠，EGF-E4orf4能够抑制肿瘤的生长速度。为今后大规模动物实验在裸鼠肿瘤移植、融合蛋白给药途径和用药剂量等方面作了初步尝试。
对MDA-MB-435S、MCF-7、U2OS、A431、A549、MDA-MB-231细胞分别采用3H-TdR掺入测定细胞DNA合成，遗憾的是，未能获得满意结果，给予不同剂量的融合蛋白处理细胞，结果看不出规律。对A431、A549、MDA-MB-231、MCF-7等细胞表面的EGFR用荧光抗体标记，流式细胞仪检测，比较细胞表面特异性平均荧光强度，结果显示：A431与MDA-MB-23l细胞的特异平均荧光强度较高，表明这两株细胞表面有EGFR的高表达，MCF-7细胞的特异平均荧光强度属中等，A549细胞的特异平均荧光强度最弱，EGFR表达量最少，为今后的研究提供了相应的实验数据及借鉴。