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第一部分NF-κB(p65),COX-2与MMP-9在神经母细胞瘤组织的表达及临床意义的研究目的探讨NF-κB(p65),COX-2与MMP-9在神经母细胞瘤组织的表达及临床意义。方法选取青岛大学附属医院石蜡包埋标本80例神经母细胞瘤组织和20例节细胞神经瘤组织病理切片标本,免疫组化检测神经母细胞瘤标本组织和节细胞神经瘤标本组织中NF-κB(p65),COX-2与MMP-9的表达,并比较年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结有无转移、有无侵润等与NF-κB,COX-2与MMP-9的表达的关系及NF-κB表达与COX-2与MMP-9的表达的关联性。结果NF-κB(p65),COX,MMP-9表达在神经母细胞瘤组织高表达,在节细胞神经瘤组织病理表达量较低,差异有统计学意义(P﹤0.01)。NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表达均与患者肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结有无转移、有无侵润相关,而与患者年龄、性别、肿瘤大小无关,差异有统计学意义(P﹤0.01);NF-κB(p65)表达与COX-2,MMP-9表达相关性分析,我们发现NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白的表达呈明显正相关(R=0.626,P﹤0.01 AND R=0.612,P﹤0.01)。结论1.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白在神经母细胞瘤均有阳性表达且高于节细胞神经瘤组织;2.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表达与患者肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结转移、有无侵润相关;3.NF-κB(p65)蛋白表达与COX-2,MMP-9蛋白表达呈明显的正相关。第二部分NF-κB信号通路在神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移中的作用及机制探讨目的探讨NF-κB信号通路在神经母细胞瘤增殖、侵袭、转移中的作用及机制方法利用transwell检测并比较神经母细胞瘤细胞细胞QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系的不同侵袭能力,CCK-8检测两株细胞系增殖能力的不同,Western blort检测NF-κB(p65)和p-IκB表达的差异。用不同浓度(5、10、20、40μmol/L)NF-κB信号通路抑制剂PDTC预处理QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系,transwell检测观察两种细胞系侵袭能力变化,Real time PCR,Western blort检测不同浓度PDTC预处理QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系NF-κB(p65),p-IκB,IκB,COX-2,MMP-9表达的差异。选择神经母细胞瘤高转移细胞系QDDQ-NM1,TNF-α不同时间和浓度预处理QDDQ-NM1,促进NF-κB信号通路活化,Real time PCR及Western blort检测不同处理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,IκB,COX-2,MMP-9基因表达变化,transwell检测细胞系侵袭能力变化。THP-1细胞系诱导产生巨噬细胞和SH-SY5Y细胞系共培养,模拟体内肿瘤微环境,Real time PCR及Western blort检测不同处理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,COX-2,MMP-9基因表达变化。结果神经母细胞瘤细胞细胞QDDQ-NM1高转移细胞系增殖及侵袭能力高于QDDQ-NM2低转移细胞系且QDDQ-NM1中NF-κB(p65)和p-Ik Bα蛋白表达高于QDDQ-NM2(P<0.01)。不同浓度NF-κB抑制剂PDTC预处理QDDQ-NM1高转移细胞系,随浓度增大QDDQ-NM1增殖能力和侵袭能力减弱,p-IκB蛋白表达逐渐减弱,COX-2,MMP-9蛋白表达也逐渐减弱(P<0.01)。不同剂量或时间TNF-α预处理QDDQ-NM1细胞系,p-Ik Bα蛋白,MMP-9,COX-2蛋白表现出剂量和时间依赖性,不同处理组间细胞侵袭能力差异有统计学意义(P<0.01)。PMA处理THP-1细胞系和SH-SY5Y细胞系共培养,共培养组与对照组或PDTC处理组相比,MMP-9,COX-2蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论1.NF-κB信号通路在神经母细胞瘤高转移侵袭细胞系活化增加;2.NF-κB的核转录启动下游基因COX-2和MMP-9的表达,增强神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移能力;3.靶向阻断NF-κB信号通路可作为治疗和预防神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移新途径。