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甲型流感病毒作为主要的病源,每年都会引起不同规模的流感疫情。NS1蛋白是甲型流感病毒主要的毒性蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。实验室在前期已经证明甲型流感病毒NS1蛋白与宿主细胞NOLC1蛋白存在特异性的相互作用,并确定了两种蛋白的特异性位点,然而对于NS1与NOLC1蛋白相互作用相关机制与影响尚不清楚。本文利用感染性克隆技术构建了H1N1(PR8)野生型(WT)病毒的八质粒系统,并根据H1N1的NS1蛋白与NOLC1蛋白的序列特异性作用位点(125D与200R)构建了三套突变型H1N1型病毒的感染性克隆转录系统。深入研究了NS1蛋白与NOLC1相互作用对流感病毒H1N1复制的影响。主要工作如下:1、通过构建H1N1甲型禽流感病毒关于感染性克隆的PHW2000双转录八质粒系统与NS1突变的三套系统,成功拯救并获得了四种流感病毒毒株:H1N1(WT)、H1N1-125、H1N1-200、H1N1-125/200;同时构建并筛选出A549的NOLC1蛋白敲降稳转细胞株(pLKO.1-TRC-NOLC1);检测出鸡胚扩增的流感病毒H1N1(PR8)的病毒滴度TCID50/mL在5.62E+5到6.40E+7之间,同时确定了合适的感染比例为MOI=0.1;2、用四种流感病毒H1N1(WT)、H1N1-125、H1N1-200、H1N1-125/200感染宿主细胞A549后,对A549细胞NOLC1的RNA表达水平与蛋白水平进行检测,发现在H1N1甲型流感病毒感染过程中,感染早期的NOLC1的量无论在转录水平还是蛋白质水平上与正常细胞相比呈上升趋势,在病毒感染后期则是呈现下降趋势。但双点突变病毒感染细胞后,宿主细胞内NOLC1变化趋势虽然与野生型感染基本一致,但在转录水平上一直低于野生型病毒感染细胞,而在翻译水平上NOLC1蛋白的量高于野生型病毒感染的细胞;3、利用四种流感病毒H1N1(WT)、H1N1-125、H1N1-200、H1N1-125/200分别感染A549细胞系,同时用H1N1(WT)感染pLKO.1-TRC-NOLC1的A549细胞稳转株,按感染时间点收集样品,通过TCID50技术检测病毒滴度与Real-time PCR技术检测病毒NP基因的三种RNA表达水平,并检测了病毒活性和复制水平的变化情况。实验结果表明,NS1蛋白上125D与200R位点与H1N1甲型流感病毒的复制有显著性影响;综上,本研究揭示了NOLC1与NS1相互作用对流感病毒感染过程中对甲型流感病毒复制的影响,NS1蛋白上125D与200R位点的突变会降低甲型流感病毒H1N1在A549细胞中的复制,为探索NS1的作用机制提供新的思路。