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目的:本课题组前期研究结果显示,NDRG1蛋白在I型子宫内膜样子宫内膜癌组织中表达上调,据此我们推测NDRG1在子宫内膜癌发生发展过程中可能起促进肿瘤发生的作用。为了阐明NDRG1在子宫内膜癌中的具体功能,我们拟进一步在体外细胞学水平研究NDRG1在子宫内膜癌发生发展中的功能及机制。 材料和方法:首先,采用shRNA介导的基因沉默技术抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞中NDRG1的表达,观察沉默NDRG1的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响(包括细胞增殖能力、克隆形成能力、体外迁移以及侵袭能力等):其次,构建包含NDRG1编码区片段全长的真核表达载体pcDNA3.1(+)/NDRG1,观察在Ishikawa细胞中过表达NDRG1对Ishikawa细胞增殖及迁移能力的影响;最后,为了阐明NDRG1在子宫内膜癌中发挥功能的机制,利用基因芯片技术,对稳定抑制NDRG1表达的Ishikawa细胞及相应空载对照细胞进行全基因组表达谱芯片扫描工作,以发现NDRG1发挥作用的通路或下游靶基因。 结果:在Ishikawa细胞中稳定抑制NDRG1的表达之后,能够显著促进Ishikawa细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移及侵袭能力等,同时能下调细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21蛋白的表达;而在Ishikawa细胞中过表达NDRG1则能显著抑制细胞的增殖和迁移能力,同时上调p21蛋白的表达。另外,通过对稳定抑制NDRG1表达的Ishikawa细胞进行全基因组表达谱芯片的扫描工作,发现了大量的NDRG1下游靶基因,包括控制细胞增殖、细胞间黏附以及细胞移动能力等的基因,结合我们之前在卵巢癌HO8910-PM细胞及子宫颈癌Caski细胞上的全基因组表达谱芯片扫描结果,初步筛选出了19个共同特异性下游差异性表达基因。这初步筛选出来的19个共同差异性表达基因为我们进一步研究NDRG1发挥功能的机制提供了研究和探讨的方向。不仅如此,我们还选取了2个共同差异性表达基因进行逆向实验,发现有一个差异性表达基因ADM2的表达情况在Ishikawa细胞中过表达NDRG1之后出现了和在Ishikawa细胞中干扰NDRG1之后相反的变化方向。 结论:NDRG1在子宫内膜癌中通过上调p21蛋白的表达发挥肿瘤抑制功能。NDRG1发挥作用的下游靶基因的发现为进一步研究NDRG1发挥肿瘤抑制功能的机制奠定了基础。NDRG1在子宫内膜癌中可能通过ADM2依赖途径发挥肿瘤抑制功能。