为进一步探索生防菌MT-06的开发前景,本文通过与化学农药混配的方法使在减少化学农药使用量的同时防治效果保持不变甚至得到加强。首先选取6种常用的化学农药杀菌剂,通过平板测定杀菌剂对MT-06的生长抑制率。由于甲基托布津、异菌脲和多菌灵对MT-06抑制率强,不宜混配,遂将这3种农药排除。测定其余3种农药百菌清、甲霜锰锌和代森锰锌对MT-06的毒力回归方程及EC50,进而计算出各农药对供试病原真菌的TSR (toxicity selective ratios)值。结果表明：代森锰锌对生防菌MT-06的EC5o为0.0595mg/ml,同时对对番茄早疫病菌、水稻立枯丝核菌及甜瓜蔓枯病菌抑制效果较好,其EC5o分别为0.01295mg/ml、0.01336mg/ml和0.026mg/ml。因此,番茄早疫病菌、水稻立枯丝核菌及甜瓜蔓枯病菌3种病原菌的TSR值大于1,分别为4.5946、4.4536和2.2885,表明具有正向选择性。同样计算得出百菌清对水稻立枯丝核菌和甜瓜蔓枯病菌的TSR值分别为12.9743和18.2633,具有中度正向选择性。甲霜锰锌对各菌的毒力测定结果为对番茄早疫病菌、茭白胡麻斑病菌、水稻立枯丝核菌及甜瓜蔓枯病菌的TSR值分别为13.9277、13.9277、2.89和2.4596。3种农药所得R值分别大于0.91、0.95和0.85。本研究将1×106个/ml MT-06孢子与浓度比对照至少降低50%的化学农药混配,通过温室盆栽试验和田间小区试验对上述毒力测定结果进行了验证。(1)番茄早疫盆栽试验结果显示各处理对番茄早疫病害的保护效果均优于治疗效果。其中0.25mg/ml甲霜锰锌与1x106个/mlMT-06孢子混配保护效果最佳,达到95.45%,高于对照2mg/ml的甲霜锰锌,但差异不显著。代森锰锌防效最高的处理是其浓度0.5mg/ml与]×106个/ml MT-06孢子混配时达到的,为90.83%。此外,1mg/ml代森锰锌与1×106个/ml MT-06孢子混配的防效86.54%也高于对照。所有MT-06与药剂混配处理与对照防效都显著高于1×106个/ml MT-06孢子单独使用时的防治效果。治疗试验效果表明,2mg/ml代森锰锌防效最好。MT-06与农药混配都未能达到较单剂防效提高的目的,代森锰锌与MT-06孢子混配的防效显著低于代森锰锌农药的对照。0.5mg/ml的甲霜锰锌与1×106个/ml MT-06孢子混配防效达到73.31%,高于其对照2mg/ml的甲霜锰锌的70.63%。(2)MT-06与农药混配防治甜瓜蔓枯病结果显示：保护作用防治效果大于单剂农药对照的为0.25mg/ml和0.5mg/ml代森锰锌与1×106个/ml MT-06孢子混配后防效,分别为75.40%、71.91%；治疗作用防效大于单剂农药对照同样为0.25mg/ml和0.5mg/ml代森锰锌与1×106个/ml MT-06孢子混配。MT-06与农药混配防治小麦赤霉病田间小区试验结果表明：试验各处理的病情指数均低于清水对照,各处理对小麦赤霉病均有不同程度的防效。防效最好的是稀释10倍的菌液,防效达到74.70%,其次是2mg/ml甲霜锰锌与l×106个/mlMT-06孢子混配的处理,防效达到72.62%,两处理防效均高于对照4mg/ml甲霜锰锌71.79%的防效,但差异不显著。所有菌药混配处理防效均高于单独使用1×106个/ml MT-06孢子,部分处理防效高于单剂农药对照,表明MT-06与农药混配可以在不影响防效的情况下大幅度减少农药的使用量。为研究MT-06的生防分子机制,根据丝状真菌PMK1类同源基因的保守区设计引物,以MT-06基因组DNA为模板扩增获得TMK1基因的保守区段,进而利用TAIL-PCR进行染色体步移和RT-PCR获得TMK1基因全长和cDNA。基因全长2145bp,包含3个内含子,编码355氨基酸的蛋白。TMK1预测蛋白与Magnapirtge grisea PMK1, Colletotrichum lagenarium CMK1, Botryotinia fuckeliana BMP1,Gaeumannomyces graminis GMK1,Pyrenophora teres PTK1等编码蛋白高度同源。利用TMK1基因cDNA构建互补载体,转化稻瘟病菌△PMK1突变体菌株nn78,随机选取6个转化子进行分析,结果显示同△PMK1突变体相比,转化子的附着胞形成及对大麦叶片的致病能力有部分的恢复,表明TMK1是稻瘟病菌PMK1的同源基因。