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与传统的癌症治疗方法相比,光热疗法具有微创性的特点,已被应用于临床研究。它利用光热剂在光辐照下将光能转化为热能,以达到杀死肿瘤细胞的目的。吲哚菁绿(Indocyanine green,ICG)是一种生物安全性良好的近红外光热剂,已广泛应用于生物医学领域,但由于其在水中呈浓度依赖性自聚集、在体内被快速清除和缺乏靶向性的缺点,限制了其在临床上的应用。为了增加ICG的稳定性,本文以丝素蛋白(Silk fibroin,SF)作为药物载体,采用超临界二氧化碳抗溶剂法(Supercritical antisolvent process,SAS)制备出丝素纳米粒(Silk fibroin Nanoparticles,SF NPs)并对其理化性能和生物安全性进行表征;然后将ICG负载到SF NPs上,制备出ICG-SF NPs,对其理化性能、载药性能、释放性能、光热性能、生物安全性进行了研究;最后考察了ICG-SF NPs的细胞毒性作用、光激发体外抑瘤效果及细胞摄取情况。首先,在CO2流速20 g/min、溶剂泵流速0.5 mL/min、温度30℃和压力10 MPa的条件下制备出空白的SF NPs,并对其形貌、粒径分布、理化性能和生物安全性进行表征,结果表明:纳米粒的球形度较好、粒径均一、平均粒径在100 nm以内;傅立叶转换红外线光谱仪(Fourier transform infrared spectrometer,FTIR)结果表明,经过超临界处理前后,丝素的特征官能团、二级结构未发生变化;X射线衍射分析(X-ray diffraction analysis,XRD)结果表明,经过超临界处理前后,丝素的晶形结构发生了改变;六氟异丙醇的残留量仅为0.051%;溶血率小于5%。其次,以ICG作为药物模型,采用超临界二氧化碳抗溶剂法制备出ICG-SF NPs,并对其形貌、粒径分布、理化性能、载药性能、释放性能、光热转化效率、有机溶剂残留和溶血率进行了研究,结果表明:ICG-SF NPs的球形度良好、粒径均一、平均粒径仍在100 nm以内;XRD和DSC结果表明,ICG载入纳米粒;投药量为4.0%的ICG,载药量在4.5%左右;同样当量浓度的ICG和ICG-SF NPs水溶液升温曲线相类似;在自然光下,ICG-SF NPs的水溶液稳定性比ICG水溶液好,8天内的升温曲线没有太大变化;六氟异丙醇残留量仅为0.0283%;溶血率低于5%。最后,考察ICG-SF NPs的体外抑瘤效果。采用CCK-8法考察细胞的增殖率和光激发下的细胞活性、Calcein/PI染色观察细胞的凋亡形态,结果表明50μg/mL以内ICG浓度的ICG-SF NPs溶液对细胞没有毒性作用,光激发下对MCF-7细胞(人乳腺癌细胞)和Hela细胞(人宫颈癌细胞)具有良好的杀伤作用。激光共聚焦追踪ICG-SF NPs在MCF-7细胞中的分布,结果显示培养4 h ICG-SF NPs能够很好被MCF-7摄取。综上所述,实验制备出的ICG-SF NPs比裸药ICG稳定,能够避免环境因素导致的ICG光热性能的衰减,能够被肿瘤细胞摄取,激光激发下发挥抗肿瘤作用。因此,SAS法制备出的ICG-SF NPs具有良好的生物相容性和良好的抑瘤效果,有望用于进一步的研究,如与其他治疗手段联合使用。