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第一部分纤维环穿刺诱导兔椎间盘退变的动物模型研究目的:观察采用18G皮肤穿刺针穿刺纤维环,诱导兔椎间盘退变建立动物模型。方法:新西兰大白兔24只,用持针器夹持18G皮肤穿刺针从左前外侧刺入L3/4、L4/5、L5/6椎间盘的纤维环,深度控制在5mm。术前及术后3、6、10周对造模后的椎间盘及正常的椎间盘(L2/3)行MRI扫描,并在术后3、6、10周对其行免疫组化及组织学观察。结果:MRI结果提示,从术后第3周到第10周,造模后的椎间盘T2WI信号呈现持续减弱趋势,免疫组化及组织学观察发现髓核细胞的数量及Ⅱ型胶原含量进行性减少(p<0.01)。结论:纤维环穿刺法可以诱导兔椎间盘的缓慢退变,这一模型为研究椎间盘退变提供了有效的载体。第二部分纤维环穿刺对兔髓核细胞中FasL表达影响的实验研究目的了解生理学屏障与FasL的分子生物学效应之间的联系,探讨椎间盘退变的发病机制。方法采用18规格的皮肤穿刺针穿刺家兔纤维环,在术后的3、6、10周收集正常及穿刺后的椎间盘组织,免疫组织化学染色观察Fas与FasL的表达,流式细胞技术分析髓核细胞凋亡指数。结果正常髓核组织中可见少许髓核细胞胞浆中FasL呈弱阳性染色,实验组髓核细胞胞浆则呈强阳性染色。FasL阳性细胞百分比在正常组与各实验组之间的差异具有非常显著性差异(P<0.001,两两比较)。三个实验组的髓核细胞平均凋亡指数明显高于正常组(P<0.001,0.002 and 0.006,两两比较)。实验组髓核细胞FasL阳性表达百分比与Fas阳性表达百分比之间具有显著相关性(r = 0.571, P = 0.0036)。结论FasL与生理学屏障的共同作用,可能是使髓核组织产生免疫豁免效应的一个重要因素。当生理学屏障受到损伤后(如穿刺纤维环),Fas/FasL系统的作用会引起髓核细胞凋亡,这也可能是椎间盘退变的发生机制之一。第三部分FasL mRNA在人椎间盘中表达的实验研究目的了解FasL目的基因在正常人椎间盘及椎间盘突出症患者椎间盘组织中的表达情况。方法收集16例腰椎间盘突出症患者的椎间盘组织(破裂型与非破裂型各8例)及4例正常人椎间盘组织,通过RT-PCR技术观察FasL,Fas,TNF and IL目的基因的表达情况,并比较其表达程度。结果正常髓核组织中仅有FasL的表达,突出的椎间盘组织中存在FasL,Fas,TNF and IL的表达,而且表达指数在破裂型组与非破裂型组之间具有显著性差异(P<0.05)。结论正常髓核组织中存有FasL的表达,提示FasL是使髓核组织产生免疫豁免效应的一个重要因素。当椎间盘突出时(纤维环破裂),则会在局部激发炎症反应,而髓核细胞通过自分泌或旁分泌途径导致FasL表达增高是可能的机制之一。