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本文以微型月季品种‘小女孩’为试验材料,在前人研究的基础上,对腋芽再生途径进行优化,并着重研究通过愈伤组织诱导形成再生芽的途径,从而建立起微型月季的离体再生体系,同时利用叠氮钠对微型月季进行化学诱变处理。结果表明:
微型月季初代培养外植体选择以5月、9月从田间生长旺盛的微型月季当年生枝上具有饱满腋芽的枝条为最佳。为减少污染和褐化,接种时不带叶柄。
微型月季初代培养的培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L,其腋芽启动率可达81.1%。
微型月季继代培养培养基为MS+6-BA5mg/L+NAA0.1mg/L+GA3lmg/L,其芽增殖系数可达5.7。继代3次可达最大增殖系数6.6。
微型月季愈伤组织诱导最适外植体为幼叶和幼叶柄,其平均诱导率分别为61.38%和54.88%。在MS培养基上附加2,4-D浓度为1.0mg/L时其诱导率可达81.35%;在MS培养基上附加NAA浓度为1.0mg/L时其诱导率可达64.08%。
微型月季愈伤组织芽分化适宜处理为MS+6-BA7.0mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.2mg/L幼叶。
微型月季试管苗生根阶段的最适培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+活性炭0.5g/L,生根率可达99.5%,生根多,生长迅速。
将微型月季组培苗在生根培养基上培养14d后,取主茎上生根部分做成石蜡切片,观察结果表明根原基起源于茎的维管形成层部分;在增值阶段,取即将产生不定芽的部位做成石蜡切片,观察结果表明芽原基起源于茎的中柱。
化学诱变处理结果表明,200mg/LNaN3处理2h可作为微型月季幼芽叶节的诱变处理。经化学诱变处理后的微型月季再生苗较未经处理的其叶片和叶柄均发生较大的变异,表现为叶片变小,叶柄伸长,叶脉更明显,叶色变红等。