肉及肉制品中鸭源成分荧光定量PCR检测方法的建立

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近年来,国内外市场上出现了许多由经济利益驱动的食品掺假和伪造的案例,食品的成分鉴别对于保障消费者权益和维护市场秩序具有重要意义。肉类食品的掺假鉴定需要对样本中的DNA进行鉴别检测,基于核酸的检测方法可以鉴定到属及亚属的水平,已经成为动物源性成分检测和物种鉴别的主流技术。本研究自主筛选设计了鸭物种特异性引物和探针,并应用实时荧光PCR探究建立了肉制品中鸭源性成分的鉴别和量化检测方法。主要研究内容和结论如下:(1)利用生物信息学方法,将鸭物种基因组DNA序列拆分打断为100 bp的片段,结合多种动物基因组DNA信息,经BLAST序列对比、筛查去重、长度过滤等步骤,结合基因组注释信息,获得鸭物种特有的单拷贝序列,针对特异性序列设计引物与Taqman探针,经常规PCR初步验证引物的特异性,获得Anapl1、Anapl2两对高特异性引物。(2)以16种动物和3种植物基因组DNA为模板,应用实时荧光PCR技术进行特异性验证、反应条件优化、灵敏度探究、检测限分析和重复性试验,建立了鸭源性成分定性检测方法。检测目的片段仅为69 bp,适用于对各种肉类食品的检测。试验结果表明本研究建立的鸭源性检测体系具有较高的特异性和稳定性,灵敏度可达10-3 ng/μL鸭源DNA,检出限为0.1%(W/W)鸭肉含量。(3)引入内参基因并构建荧光定量标准曲线,建立了鸭源性成分的量化检测方法。构建的标准曲线R2均在0.99以上,且具有良好的扩增效率。对模拟样品中的鸭源性成分定量检测的平均回收率可达96.67%,检测结果具有较高的准确性。应用该方法对15份市售样品中的鸭源性成分进行定性和定量检测。结果表明,本研究所建立的方法可以有效地鉴别市售肉类食品中的鸭源性成分,检测结果可作为掺假鉴别的参考依据,具有良好的实用性。
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