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目的:60Co-γ射线对多种微生物均有杀灭作用,其中包括经血液传播的病毒体。60Co吖射线辐照技术过去主要用于医疗用品的消毒灭菌处理,本研究尝试用它灭活处理血浆蛋白制品中的病毒,目的是寻找新的血浆蛋白制品病毒灭活技术,提高血液制品应用的高安全性。
方法:以sindbis病毒作为试验病毒,以人静脉注射用免疫球蛋白作为处理对象,以Vc、Vc-Na和TP三种强抗氧化剂作为蛋白保护剂,观察了蛋白保护剂对Y.射线灭活液态和冻干血浆蛋白制品中病毒的影响,同时通过PAGE电泳、HPLC、ITM、SRID、ELISA以及Westemblot等方法分析了IgG分子结构与功能的变化:
结果:
一、砷Co吖射线灭活液态IVIG中的病毒:30kGy6~Co-?射线辐照能完全灭活液态IVIG中6.5LgTCIDso的Sindbis病毒,但对IgG分子结构和功能损伤明显,活性抗原量与辐照前相比仅剩30%左右。加入0.025—0.2mg/ml的Vc、Vc-Na和TP三种蛋白保护剂不影响60Co吖射线(30kGy)灭活液态IVIG中的Sindbis病毒效果,IgG分子结构得到一定保护,分子聚合及断裂明显减少;含0.2mg/ml蛋白保护剂的液态样品中,IgG活性抗原量与无保护剂组相比提高了近一倍,三种保护剂的保护效果基本一致。同样加入2.5—40mg/ml浓度的蛋白保护剂Vc也不影响60Co吖射线(45kGy)灭活液态IVIG中的Sindbis病毒效果;IgG分子结构得到进一步保护,正常单体IgG含量进一步提高;含40mg/mlVc的液态样品中,IgG活性抗原量约是不含Vc组的3倍。
二、砷Co吖射线灭活冻干IVIG中的病毒:30kGy6~Co.y射线辐照能完全灭活冻干IVIG中5.5LgTCIDso的Sindbis病毒;IgG分子发生一定程度聚合和裂解,IgG活性抗原量与辐照前相比损失30%左右。低浓度的Vc、Vc-Na和TP(0.0125—0.2mg/m1)蛋白保护剂对6~Coiy射线(30kGy)灭活冻干IVIG中的Sindbis病毒影响较小,含保护剂处理组的IgG分子聚合和断裂明显减少,而不含保护剂的IgG分子则发生明显的聚合和断裂;处理后冻干样品中的活性抗原量与无保护剂组相比提高了10%左右,Vc、Vc-Na和TP三种保护剂对冻干样品中的IgG抗原活性均有一定的保护作用。在45kGy60CO吖射线照射下,提高冻干IVIG中蛋白保护剂Vc的含量(2.5—40mg/m1)也未影响病毒灭活效果,IgG分子发生聚合或裂解的比例随保护剂含量的升高而降低,当Vc含量达到40mg/ml时,处理后的正常IgG单体含量达到90%以上,处理后的IgG活性抗原量也在70一80%之间。
三、~Co-7射线对其它冻干血浆蛋白分子结构和功能的影响:30kGy6~Co-7射线对牛纤维蛋白原分子结构损伤明显,处理后的蛋白含量仅剩30%;照射后冻干血浆中凝血因子活性损失30—50%,白蛋白、血浆蛋白含量保持在80%以上;处理后的冻干HBsAb抗体活性保持在50%左右。分别经4h、8h和16h冷冻干燥的IVIG样品经30kGy照射剂量处理后,各组间蛋白损伤变化差别不明显。不论采取低剂量率照射还是高剂量率照射,当照射剂量为30kGy时,两者对IgG分子结构和功能的影响也无明显差别。
结论:60Co-γ射线灭活液态和冻干血浆蛋白制品中的病毒效果良好,但对两种剂型中的血浆蛋白结构与功能都有不同程度的影响;Vc等具有保护蛋白免受γ射线损伤的作用,保护效果与其含量有关。60Co-γ射线辐照技术有望用于冻干血浆蛋白制品的病毒灭活上。