人类白癜风是一种顽固性皮肤病。主要表现为皮肤呈斑块状或片状脱色变白。形态学上可见病损皮肤色素颗粒减少，黑素细胞破坏、数量减少乃至消失。白癜风的确切发病机制尚未清楚，根据目前的实验证据人们普遍认同自身免疫病是其主要发病机制。驱虫斑鸠菊注射液(vernoniaanthelmintica willd injection，VW)是利用科学方法从新疆特有的菊科植物——驱虫斑鸠菊的种子中提炼而成的，其主要成分为黄酮类物质。经多年临床应用显示，该药对白癜风具有明显治疗效果。由于目前国内尚未引进白癜风的模型动物，国内也没有被国家有关部门正式认可的模型动物，故本研究利用正常小鼠作为实验动物，着重研究驱虫斑鸠菊在体内、体外对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响；应用体外细胞培养技术研究驱虫斑鸠菊对酪氨酸酶活性的影响，并利用酶学测定方法等研究驱虫斑鸠菊对黑素瘤细胞分泌酪氨酸酶活性、黑素瘤细胞生长状况、黑素分泌活性等的影响；应用RT-PCR技术研究了驱虫斑鸠菊对黑素瘤细胞mRNA表达的影响，从整体、器官、细胞、分子四个不同层次探讨了驱虫斑鸠菊对小鼠免疫系统、黑素合成等方面进行了较为系统的研究。此项研究为探讨白癜风的发病机制奠定了分子基础，为驱虫斑鸠菊注射液开发成国家二类中医药新药提供实验依据。此外，本研究还利用质谱方法研究了与白癜风发病有关的蛋白质的肽质量指纹图谱，为白癜风相关抗原结构与功能研究，揭示白癜风发病机制以及开发黑素瘤免疫治疗新方法进行了有益的探索。该课题为国家科委生物生命中心资助的与新疆自治区人民医院临床药学研究所的合作课题。 1 驱虫斑鸠菊注射液对小鼠免疫功能的影响研究 本文首次应用新疆特有的菊科植物提炼的驱虫斑鸠菊注射液，较系统地研究了白癜风治疗药物对小鼠免疫功能的影响。应用[~3H]—TdR掺入法，测定了驱虫斑鸠菊对小鼠体内外免疫功能的影响；采用脾细胞介导羊红细胞定量溶血分光光度法测定了脾脏B淋巴细胞分泌抗体活性；采用迟发型超敏反应试验测定了T淋巴细胞介导炎症反应；运用酶联免疫吸附实验测定驱虫斑鸠菊对小鼠B淋巴细胞分泌抗体功能的影响；采用流式细胞仪测定了B淋巴细胞表面标志物CD19表达水平；采用[~3H]—TdR掺入法利用CTLL-2细胞株测定T淋巴细胞分泌IL-2活性。结果显示：在器官水平：驱虫斑鸠菊对小鼠胸腺指数和脾脏指数有明显的抑制作用。在细胞水平：驱虫斑鸠菊在体内外均可以明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的增殖反应和LPS刺激的小鼠B淋巴细胞的增殖反应(P<0．01)；B淋巴细胞表面标志物CD19表达受到明显的抑制作用；对小鼠皮肤迟发型超敏反应显示出明显的抑制作用。驱虫斑鸠菊还可使绵羊红细胞(SRBC)诱导的正常小鼠脾脏抗体形成反应受到明显抑制；在分子水平：驱虫斑鸠菊对正常小鼠血清中IgG、IgM、IgA含量有明显抑制作用。对人A375黑素瘤细胞抗原免疫小鼠的血清中总IgG和黑素瘤细胞抗原特异性IgG含量有明显抑制作用，对脾脏T淋巴细胞分泌IL-2活性也具有明显抑制作用。而且上述抑制作用与药物浓度呈现一定的剂量效应关系。本实验结果首次提示：驱虫斑鸠菊对正常小鼠体液免疫、细胞免疫都有明显的抑制作用。2 驱虫斑鸠菊防治白疲风分子机理的实验研究2驱虫斑鸠菊对酪氨酸酶活性和黑素合成影响研究 首次对驱虫斑鸠菊注射液体内外对酪氨酸酶、黑素细胞增殖、黑素分泌活性等进行了较系统的研究。利用酶学方法研究了驱虫斑鸠菊体外对酪氨酸酶激活作用；以及体外对培养的人A375和小鼠B16黑素瘤细胞和体内对小鼠血清中酪氨酸酶活性的影响；利用四甲基偶氮哇蓝（MTT）比色法测定驱虫斑鸠菊对黑素瘤细胞增殖作用的影响；利用分光光度法测定黑素瘤细胞分泌黑素活性的影响。结果显示：驱虫斑鸠菊体外可直接激活酪氨酸酶活性；体内可促进正常小鼠血清中酪氨酸酶活性；还可明显促进体外培养的人A375和小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶合成和分泌；对黑素瘤细胞具有促进增殖活性和分泌黑素的作用。本实验结果’提示：驱虫斑鸠菊对白掇风的治疗作用可能是通过调节黑素细胞增殖活性；促进酪氨酸酶合成和分泌作用，进而达到促进黑素合成或再生作用。3驱虫斑鸠菊诱导人黑素瘤细胞酪氨酸酶基因表达水平的调节 为了深入探讨驱虫斑鸠菊对酪氨酸酶及黑素合成的作用机理，本实验在上述酶活性测定基础上，首次采用盯－PCR技术，探讨了驱虫斑鸠菊对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶IlRNA的影响，结果显示，用驱虫斑鸠菊处理人A375或小鼠B16黑素瘤细胞3天后，均可明显增强酪氨酸酶InRNA的表达，说明驱虫斑鸠菊促进酪氨酸酶活性；可以通过调节酪氨酸酶InRNA基因转录发挥作用。4白掇风相关抗原的探索研究 首先利用Western blotting对人A3乃黑素瘤细胞蛋白进行鉴定，确定出与人白掇风血清中抗体相对应的抗原蛋白带，然后从SDS－PAGE凝胶上切下目的蛋白带，经脱色处理后用胰蛋白酶进行酶解，再进行eLDI二 肽质谱指纹图分析，然后将肽质谱分析数据在已知蛋白数据库中进行检索，从而对蛋白质进行鉴定。本实验用一名白摄风患者血清进行实验，发?