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目的:观察红景天苷(SDS)药物血清对新生大鼠海马神经干细胞分化的影响,旨在进一步推动利用中药研究神经干细胞的发展。
方法:采用神经球连续形成法从新生24h内的Wistar大鼠海马组织分离、培养神经干细胞,通过连续传代培养观察其自我更新能力。采用神经干细胞Nestin免疫细胞化学染色,鉴定所分离的细胞是否为神经干细胞。将BrdU加入细胞悬液中,验证神经干细胞的分裂增殖能力。将第3代培养的神经球接种在2块24孔培养板中,每块板分成4组,分别是正常血清对照组,红景天苷高、中、低剂量药物血清组。培养7d、14天后,分别行NSE(神经元特异烯醇化酶)、GFAP(胶质纤维酸性蛋白)免疫细胞化学染色,计数阳性细胞;并对各组NSE阳性细胞的面积、周长进行图像分析;对组间差异进行统汁学检测。
结果:新生大鼠海马分离的单个细胞通过培养,可形成神经球,经免疫细胞化学检测为Nestin阳性细胞。BrdU孵育后,新形成的神经球BrdU免疫标记阳性。同一时间内,各药物实验组诱导神经干细胞分化为NSE阳性细胞的个数明显高于对照组(P<0.01),分化为GFAP阳性细胞的个数明显低于对照组(P<0.01);且呈量效依赖关系;分化为NSE阳性细胞的面积与周长明显大于对照组(P<0.01)。
结论:自新生大鼠海马能够分离、培养出神经干细胞,应用机械法消化细胞、控制细胞接种的密度,可获得增殖效果理想的神经干细胞。红景天苷血清可促进神经干细胞向神经元方向分化,在一定范围内存在量效依赖关系,并对所分化的神经元样细胞有促生长、发育作用。