论文部分内容阅读
目的:Myocardin是一种对平滑肌细胞分化起决定作用的细胞因子之一。目前研究认为myocardin通过与SRF(serum response factor)的协同作用,促使平滑肌特异性基因的表达。Myocardin表达的升高或降低可引起血管平滑肌的分化或去分化,最终导致血管的病理性改变。氯化钾可引起细胞外钙内流,从而激活Rho信号通路来促进myocardin mRNA的表达。阿托伐他汀(Atorvastatin,ATV)是HMG-CoA(Hydroxymethylglutaryl-CoA)还原酶抑制剂,是临床应用广泛的降血脂药物。ATV在无明显降低血脂的情况下对心血管具有保护作用,但机制尚不清楚。ATV是否通过影响血管平滑肌细胞myocardin的表达从而对心血管具有保护作用尚不清楚。因此,我们拟对血管平滑肌细胞中ATV与myocardin表达的关系进行研究,同时探讨了阿托伐他汀(ATV)、氯化钾(KCl)或转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMS0)对myocardin表达的影响。
方法：通过组织块培养发法获得大鼠原代平滑肌细胞(SMC),培养至5-8代用于实验,实验前,SMC先在DMEM/F12(0.5％FBS,(100U/ml青霉素,100 mg/ml链霉素)培养基中饥饿三天,随后用ATV,KCl,TGF-β1,DMSO处理,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time Polymerase chain reaction, Real-time PCR)方法检测SMC中myocardin的mRNA表达量。
结果:KCl(60 mM)及TGF-β1(10 ng/ml)对myocardin mRNA表达无影响(KCl 0.73±0.06,TGF-β1:0.68±0.06 VS control：0.78±0.13,P>0.05,n=7),另外,DMSO也不影响myocardin mRNA的表达。在DMSO存在的情况下,不管是KCl还是TGF-β1均不刺激myocardin的表达。单独ATV处理也不影响myocardin的表达,A1W和KCl(不是TGF-β1)协同作用则明显地刺激myocardin的表达(ATV+KCl: 1.54±0.18 VS DMSO+KCl: 0.66±0.11,P<0.01,n=7)。
结论：
1.在平滑肌细胞生长数量达70％时,KCl,TGF-β1,DMSO对myocardinmRNA表达无明显影响。
2.ATV和KC1协同作用可以明显促进myocardin mRNA的表达。