丙型肝炎病毒的基因组是一条9.4kb的单股正链RNA分子。HCV-NS4A编码二个病毒多肽：NS4A和NS4B。HCV-NS4A蛋白作为一种非结构形式，主要的生物学功能是作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子，在HCV多蛋白的成熟过程中发挥着重要的调节作用；NS4B的功能目前尚无确切资料。我们克隆了NS4区部分基因，进行了表达、纯化，研究了NS4抗原的作用特点。本课题分以下三部分进行： 第一部分：丙型肝炎病毒NS4片段的克隆 以HCV-J质粒为模板，设计引物，经PCR扩增获取NS4基因片段(4U4D)；将PCR产物克隆到PMD18-T中，再将该片段用BamHI和KpnI双酶切定向克隆到PQE30载体中，构建PQE30-4U4D重组质粒。经酶切、测序鉴定，目的基因克隆结果正确。 第二部分：丙型肝炎病毒NS4基因片段的原核表达与纯化 将PQE30-4U4D重组质粒导入M15菌，培养、IPTG诱导、离心、收集菌体、超声粉碎、粗纯化，12％SDS-PAGE对培养物分析表达相对分子量Mr约25KD的可溶性蛋白，其氨基端有6个组氨酸，以Ni-NTA柱亲和层析纯化。 第三部分：丙型肝炎病毒NS4基因片段表达产物的抗原性分析 以NS4纯化蛋白产物为抗原包被酶标板，ELISA结果显示：NS4抗原在大部分阳性标本中其反应性相对最强，说明NS4蛋白在HCV感染中具有诊断价值。